[发明专利]评价3-氯-1,2-丙二醇及其酯短期暴露的巯基尿酸加合物检测方法及应用

权利要求书

1.评价膳食3-MCPD短期体内暴露的巯基尿酸加合物同步检测方法，其特征是包括以下步骤：

(一)样品预处理：

将啮齿类动物尿液/高级哺乳动物尿液进行预处理，作为进样；

1、啮齿类动物尿液预处理方法：

在5～50μL的啮齿类动物尿液中加入同位素内标D₅-DHPMA 0.1μg，用稀释液稀释定容至1mL，涡旋混匀；经0.22μm微孔滤膜过滤后进样分析；

所述稀释液为0.1～0.5％甲酸水溶液，所述％为体积％；

2、高级哺乳动物尿液预处理方法：

高级哺乳动物尿液，取1mL，加入混合同位素内标D₅-DHPMA 0.1μg，再依次加入10μL甲酸和2mL的50mmol/L、pH 2.5的甲酸铵，或者依次加入50μL浓度为4mol/L的盐酸溶液和2mL的50mmol/L,pH 2.5的甲酸铵；涡旋混匀后离心；

将上清液至固相萃取柱，待流干后用1～4mL0.1％甲酸水溶液作为淋洗液进行淋洗，去除杂质并弃去淋洗液；最后用1～4mL1％的甲酸甲醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液吹干，用初始流动相溶液定容至1mL，涡旋溶解，经0.22μm微孔滤膜过滤后进样分析；

所述初始流动相溶液由流动相A：流动相B＝90:10～98:2的体积比组成；流动相A为0～1％甲酸水，流动相B为0.1％甲酸乙腈；所述％为体积％；

(二)色谱条件：

色谱柱种类及规格为ACQUTITYBEH AMIDE、ACQUTITYBEH Shield RP或ACQUTITYHSS T3；

进样体积为1～10μL；

流速：0.2mL/min；柱温：40℃；

流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为0～1％甲酸水，流动相B为0.1％甲酸乙腈，上述％为体积％，梯度洗脱程序如下表1：

表1

(三)质谱条件：

仪器：三重四级杆串联质谱仪；质谱定量方法：多重反应监测；离子源：电喷雾负离子扫描方式；鞘气温度：375℃；鞘气流速8L/min；喷嘴电压：500V；雾化器压力：45psi；干燥气温度：300℃；干燥器流速：5L/min；载气：氮气；碰撞气：氮气；

锥孔电压和碰撞电压见表2；

表2、DHPMA的质谱参数

注：^a为定量离子通道，^b为定性离子通道

四、数据计算：

采用标准曲线法对检测结果进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的评价膳食3-MCPD短期体内暴露的巯基尿酸加合物同步检测方法，其特征是：所述啮齿类动物尿液预处理方法中，

在5～50μL的动物尿液中加入10μL同位素内标液，再用稀释液稀释定容至1mL，

所述同位素内标液是由浓度为10μg/mL的同位素内标以及作为溶剂的稀释液组成。