[发明专利]评价3-氯-1,2-丙二醇及其酯短期暴露的巯基尿酸加合物检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种评价膳食3‑MCPD短期体内暴露的巯基尿酸加合物同步检测方法，包括以下步骤：将啮齿类动物尿液/高级哺乳动物尿液进行预处理，作为进样；色设定谱条件进行梯度洗脱；设定质谱条件进行质谱定量检测；采用标准曲线法对检测结果进行定量分析。本发明实现了DHPMA这一巯基尿酸加合物的检测，通过直接检测尿液代谢物就能实现3‑MCPD这一食品加工污染物的内暴露分析。

技术领域

本发明涉及一种评价膳食3-氯-1,2-丙二醇短期体内暴露的巯基尿酸加合物同步检测方法及其应用，属于食品安全领域。

背景技术

氯丙醇是甘油的氯化物，有1个或者2个氯原子与甘油分子的羟基发生亲核取代后形成氯丙醇。氯丙醇是一类化合物的总称,其中包括3-氯-1,2-丙二醇(3-monochloropropane-1,2-diol；3-MCPD)和2-氯-1,3-丙二醇(3-monochloropropane-1,3-diol；2-MCPD)以及双氯取代的1， 3-二氯-2-丙醇(1,3-dichloropropan-2-ol；1,3-DCP)和2，3,-二氯-1-丙醇 (2,3-dichloropropan-1-ol；2,3-DCP)。1978年，氯丙醇被Velisek等人研究酸化水解植物蛋白时所发现。此后，经过不断的努力，氯丙醇这一污染物在食品中有了显著减少，然而，食品中的氯丙醇酯类污染物被大家所忽视，直到Svejkovska(2004)等人报道了此类物质的存在，其含量远远高于游离3-MCPD，并且在随后发现其来源是食用油，包括使用油脂的许多食品中都检测到较高浓度的3-MCPD酯，特别是精炼植物油，都不同程度地含有3-MCPD酯。国际癌症研究机构(IARC)将3-MCPD列为2B类致癌物(对人类很可能有致癌性)，其具有神经毒性、生殖毒性、肾脏毒性等。2001年,JECFA再次评价了3-MCPD,肾小管增生的最低可观察作用剂量(lowest observed effect level，LOEL)为1.1mg/kg.bw,提出3-MCPD暂定每日耐受摄入量(provisional maximum tolerable daily intake，PMTDI)为2μg/kg.bw。2006年，布拉格化工学院的学者们通过分析25种零售食用油(包括毛油和精炼油)发现食用油中3-MCPD酯的形成跟油料种子的热炒(或烘烤)及精炼加工过程有关。食品中的氯丙醇酯的来源除食用油外，如酥性饼干、面包、咖啡、咖啡伴侣、麦芽、奶粉、油炸土豆片等食品等都不同程度地检测出了氯丙醇酯。3-MCPD酯可以在人体内代谢形成3-MCPD和脂肪酸，目前国际上比较认可等摩尔质量的3-MCPD酯和3-MCPD毒性相当，并且3-MCPD酯的种类非常多，对其毒性研究仍在起步阶段，而对于3-MCPD的毒性研究已经较多。Lampen等人认为氯丙醇酯在人体内 100％的代谢成等摩尔质量的氯丙醇，这一假设在EFSA(European FoodSafety Authority)2016 年报告中也得到认可。

目前，食品中3-MCPD的分析主要以色谱分离以及质谱分析技术为检测手段，气相色谱 -质谱(GC-MS)联用技术应用尤其广泛。常用的3-氯-1，2-丙二醇检测方法是先将3-氯-1，2-丙二醇进行衍生，衍生方法有酮类衍生、硼酸类衍生(苯基硼酸、丁基硼酸)、酸酐类衍生、七氟丁酰咪唑(HFBI)等；衍生后再进行GC-MS检测。氯丙醇酯的检测方法分为间接法和直接法。间接法是首先采用酸解(如硫酸)或碱解(甲醇钠甲醇溶液或NaOH甲醇溶液)或酶解(特定的脂肪酶)的方法，将氯丙醇酯中的脂肪酸解离，使氯丙醇酯转变成氯丙醇，然后采用衍生试剂苯硼酸(PBA)或七氟丁酰基咪唑(HFBI)衍生后经GC-MS分析。德国油脂协会(DGF)2011年发布了同步测定油脂中3-MCPD酯和缩水甘油酯的方法，该方法目前被广泛接受。直接法测定3-MCPD酯，无需对样品进行水解，且无需衍生化，只需要对油脂样品进行简单处理，如均质，溶剂溶解稀释等，然后直接进样，通过液相色谱-质谱联用法(如 LC-MS，LC-MS/MS，LC-TOF/MS等)分析样品中的待测物质。