[发明专利]重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备方法

说明书

本发明公开了重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备方法，蛋白工作种子批菌种开启后接种于一个三角瓶中，将一代生产菌种接种于种子罐中进行传二代培养，将二代生产菌种接种于发酵罐中进行传三代培养；发酵结束后，菌液通过连续流离心去除上清收获菌体；菌体溶解，破菌；进行结合，结合完成后，对其进行清洗，进行酶切，采用层析柱对蛋白酶切液进行纯化然后脱盐、去内毒素、除菌过滤保存。本发明的制备方法简单，能大规模制备得到重组金黄色葡萄球菌蛋白。

技术领域

本发明涉及蛋白原液领域，具体涉及重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备方法。

背景技术

金葡菌是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌，呈多重耐药性发展而成为临床上治疗的难点，急需研制疫苗控制其感染与流行。

金葡菌有“嗜肉菌的别称，作为革兰氏阳性菌的代表，是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌。感染以急性、化脓性为特征，局部可引起皮肤和软组织等的化脓性感染，经久不愈；全身可导致急性肺炎、脓毒血症、心内膜炎、脓毒性关节炎、骨髓炎等严重感染及并发症，死亡率高达20％。同时，金葡菌的外毒素还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征和中毒性休克综合征等全身致死性感染。

随着抗生素长期、广泛地使用，细菌耐药性问题日益突出，作为典型代表的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)自1961年被首次发现至今，目前已成为全球ICU病房、术后感染、烧伤、战创伤等感染率最高的院內感染病原菌之一。同时，因其致病性强、传播途径广泛、易暴发流行，呈多重耐药性发展而成为临床上治疗的难点，被称为“第一超级细菌”。

MRSA分为医院获得性MRSA(healthcare-associated MRSA，HA-MRSA)及社区获得性MRSA(community-associated MRSA，CA-MRSA)。

2009年，据美国CDC在《新英格兰医学杂志》报道，美国每年MRSA严重感染人数约为9万人，致死病例约为2万人。2010年12月中国“MRSA院内感染诊治策略新进展”会议资料显示，我国内地医院院内MRSA感染发生率约为8％，每例院内感染患者平均住院时间延长14天，花费增加6542元，全国每年因医院感染造成的直接损失超过150亿元。同时，由于抗生素的滥用，临床高度耐药性金葡菌，尤其是MRSA的分离检出率逐年上升。中国2011年全国细菌耐药监测报告显示，在全国129家三甲医院被检的273808株细菌中，金葡菌位列临床革兰阳性菌分离量首位，MRSA检出率占被检出金葡菌的60％，广泛耐药率超过40％。基于这种严峻形势，我国已将MRSA列为21世纪可能对国人卫生健康有重大影响的12种病原微生物之一。当前MRSA已与乙型肝炎、AIDS被列为世界三大最难解決的感染性疾病，并位居首位。目前，万古霉素是治疗MRSA感染的最后一道防线，但随着2002年耐万古霉素金黄色葡萄球菌(vancomycin-resistant staphylococcus aureus，VRSA)的相继出现，高度耐药性发展的MRSA和VRSA在全球呈蔓延趋势，使得临床金葡菌的感染面临“无药可治”的严峻挑战。

抗生素的研发速度远远跟不上细菌耐药性的发展速度，而安全有效的金葡菌疫苗将可成为预防金葡菌感染的有效手段。WHO于2011年提出了“抵抗耐药菌”的“六点政策一揽子计划”，并强调在未来重点支持创新性疫苗等免疫防控制品的研发。因此，加强对金葡菌感染的免疫防治研究，研制安全、有效的新型金葡菌疫苗将对有效控制金葡菌广泛感染及大规模爆发流行、大幅降低金葡菌院内感染的发病率及耐药性蔓延等方面具有重要的现实及战略意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是目前金葡菌院内感染的发病率较高，并且其耐药性蔓延较快不易被控制，现有的重组金黄色葡萄球菌疫苗不能规模化的制备，制备效率较低，目的在于提供重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备方法，解决重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备的问题。

本发明通过下述技术方案实现：