[发明专利]一种Ⅰ群11d型禽腺病毒株、灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.Ⅰ群11d型禽腺病毒株，命名为禽腺病毒RC18，该病毒株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.17404，保藏时间为2019年3月21日。

2.权利要求1所述的Ⅰ群11d型禽腺病毒株在制备I群11d型禽腺病毒灭活疫苗中的用途。

3.一种I群11d型禽腺病毒灭活疫苗，其特征在于，含有灭活后的权利要求1所述的Ⅰ群11d型禽腺病毒株。

4.一种制备权利要求3所述的I群11d禽腺病毒灭活疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1所述的Ⅰ群11d型禽腺病毒株接种鸡胚或鸡肝癌细胞、收获病毒抗原液、灭活和乳化的步骤。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）病毒抗原液的制备

a. 病毒接种：

将权利要求1所述的Ⅰ群11d型禽腺病毒株通过绒毛尿囊膜的途径按10^{3 .0}～10^{4 .0}ELD₅₀/0.1ml接种于7日龄SPF鸡胚，0.2ml/胚，37℃孵化箱培养，定期观察，弃24h内死胚；

b. 收获病毒抗原液：

取接种48h～168h内死亡鸡胚的尿囊液和胚体，收集死胚尿囊液和胚体，将胚体无菌环境下研磨后与尿囊液一并装于灭菌容器内，－20℃保存；

c. 灭活：

将收获的病毒抗原液浓缩至10^6.5ELD₅₀/0.1ml，向浓缩后的病毒抗原液中加入终浓度为2％v/v的甲醛溶液摇匀，37℃灭活16～20h，得到灭活后的病毒抗原液；

2）疫苗制备

a. 水相制备：

在96份灭活后的病毒抗原液中加入灭菌的吐温-80 4份，边加边充分搅拌，直到吐温-80完全溶解；

b. 油相制备：

按油相: 水相体积比为3:1的比例计算油相用量，取注射用白油94份，硬脂酸铝1份，置于油相制备罐中加热至80℃，再加入司本-80 6份，至温度达到130℃时维持30分钟，冷却后备用；

c. 乳化:

取3份油相放入乳化罐内，150转/分速率边加边搅拌1份水相，待水相加完后持续保持低速搅拌30分钟混匀水油相，在20～25℃下，以4000r/min剪切速率剪切2次，直至乳化合格为止，制成所述的I群11d禽腺病毒灭活疫苗。