[发明专利]一种黑龙江茴鱼群体特异性分子标记引物、试剂盒及鉴定方法

权利要求书

1.一种黑龙江茴鱼群体特异性分子标记引物，其特征在于，引物为ThtC1010、ThtC1029、ThtC1034；其中，ThtC1010的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示，ThtC1029的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物序列如SEQ IDNO.4所示，ThtC1034的上游引物序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物序列如SEQ ID NO.6所示。

2.一种黑龙江茴鱼群体鉴定的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括2×Taq PCR Mix和超纯水。

4.一种用于黑龙江茴鱼群体的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样本采集：采集黑龙江不同流域的茴鱼样本；

(2)基因组DNA提取：采用酚氯仿法提取茴鱼样本DNA；

(3)PCR扩增：以提取的基因组DNA为模板，利用权利要求1的引物进行PCR扩增；

(4)电泳染色对比图谱：PCR反应结束后，取PCR产物电泳检测，根据电泳结果与提供的标准图谱对比，进行鉴定。

5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，PCR扩增的反应体系为20μl，各成分为：2×Taq PCR Mix 10μl、50ng/μl基因组DNA 2μl、10μM上下游引物各0.5μl，用超纯水补足20μl。

6.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，PCR扩增的反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，25个循环；72℃最后延伸5min。

7.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，不同流域为根河、洮儿河和乌苏里江。

8.根据权利要求7所述的鉴定方法，其特征在于，标准图谱中，

引物ThtC1010的PCR扩增产物为A条带的是根河群体；PCR扩增产物为B条带的是洮儿河群体和/或乌苏里江群体；

引物ThtC1029的PCR扩增产物为C条带的是根河群体；PCR扩增产物为D条带的是洮儿河群体和/或乌苏里江群体；

引物ThtC1034的PCR扩增产物为E、F和G条带中1个或2个的是根河群体；PCR扩增产物为H条带的是洮儿河群体；PCR扩增产物为I条带或I和H条带的是乌苏里江群体。

9.一种如权利要求1所述的引物在黑龙江茴鱼群体种质鉴定中的应用。

10.一种如权利要求1所述的引物在黑龙江茴鱼群体分子标记辅助选择育种中的应用。