[发明专利]一种检测水稻上井冈霉素残留的方法

权利要求书

1.一种检测水稻上井冈霉素残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：样品处理

田水样品的处理：直接量取田水样品溶液；

植株、稻壳样品的处理：称取2.5g植株样品或稻壳样品，置于50mL离心管中，加入15mL水浸润后超声60min，再加入10mL甲醇回旋震荡提取60min，然后再在转速4000r/min下，离心处理5min后吸取上层清液，重复上述步骤1-3次，合并上层清液得到植株或稻壳的样品溶液；

土壤、糙米的处理：称取5g土壤样品或糙米样品，置于50mL离心管中，然后加入15mL水浸润后超声60min，再加入10mL甲醇回旋震荡提取60min，然后再在转速4000r/min下，离心处理5min后，吸取上层清液，重复上述步骤1-3次，合并上层清液得到土壤或糙米的样品溶液；

S2：样品溶液浓缩

样品溶液的浓缩：将各样品溶液调节pH值为2-3，然后利用层析柱进行吸附收集，依次用pH3.5磷酸盐缓冲溶液和乙醇淋洗去除杂质，再用洗脱剂进行洗脱，所得洗脱液利用旋转蒸发仪浓缩近干，再用氮气或空气吹干，定量加入2mL的pH7.0磷酸氢二钠-磷酸氢钾缓冲溶液，超声溶解得到各样品浓缩液；

S3：检测

田水的样品浓缩液利用0.22μm亲水性PTFE滤膜过滤后，利用高效液相色谱进行检测；植株、稻壳、土壤或糙米的样品浓缩液也利用0.22μm亲水性PTFE滤膜过滤后，利用液相色谱质谱联用进行检测。

2.根据权利要求1的一种检测水稻上井冈霉素残留的方法，其特征在于，田水的样品浓缩液利用高效液相色谱按照下述液相色谱条件进行检测：岛津LC-20AT液相色谱仪，配紫外检测器(UVD)；色谱柱：ODS-SP(4.6×250mm 5μm)；流动相：0.005mol/L磷酸氢二钠-磷酸和2％甲醇；流速：0.7mL/min；检测波长：210nm；进样量：20μL。

3.根据权利要求1的一种检测水稻上井冈霉素残留的方法，其特征在于，植株、稻壳、土壤和糙米的样品浓缩液利用液相色谱质谱联用按照下述待色谱条件和质谱条件进行检测：

色谱条件：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC R BEH C18，1.7μm，2.1mm×100mm；柱温：40℃；流动相：A由溶液体积比为2:98水和甲醇的混合溶液、0.05％甲酸和5mmol/L的乙酸铵溶液组成，B由甲醇和0.05％甲酸组成，流动相采用梯度洗脱；流速：0.25mL/min，进样量：5μL；

质谱条件：毛细管电压：3.0kv；离子源温度：150℃；锥孔反吹气流量：50L/h；脱溶剂气温度：400℃；脱溶剂气流量：800L/h；监测模式：MRM模式；电离方式：ESI⁺；母离子：498.3m/z；子离子：336.6m/z；锥孔电压：30v；碰撞电压：30v；驻留时间：0.050s。

4.根据权利要求3的一种检测水稻上井冈霉素残留的方法，其特征在于，色谱条件中的梯度条件分为四个阶段，第一阶段0-0.25min，流动相A和B的体积比为7:3；第二阶段0.25-2min，流动相A和B的体积比为3:7；第三阶段2-3min，流动相A和B的体积比为1:9；第四阶段3-4min，流动相A和B的体积比为7:3。

5.根据权利要求1的一种检测水稻上井冈霉素残留的方法，其特征在于，S2步骤中的洗脱剂为1mol/L的氨水与乙醇的混合溶液，氨水与乙醇的体积比为4:1，洗脱速度为0.8mL/min。