[发明专利]一种香豆素衍生物及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种香豆素衍生物CNS，其特征在于，结构式为：

2.如权利要求1所述的一种香豆素衍生物CNS的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)按摩尔比1:1～1.5将3-乙酰基-7-二乙基氨基-香豆素与对羟基苯甲醛在无水乙醇中搅拌溶解；加入催化量的哌啶，逐渐加热至回流，回流后搅拌该混合溶液12～24小时，待反应完全后，减压除去溶剂，经硅胶柱层析纯化，得到橙色粉末即化合物1；

2)将化合物1和NBD-Cl按摩尔比1:1～1.5一同溶解于无水乙醇中，随后加入催化量的TFA,常温下搅拌12～24小时，然后将反应溶液倒入冰水中，搅拌2～2.5小时，用适量的二氯甲烷萃取，收集有机相，干燥，减压除去溶剂后经硅胶柱层析纯化，得到橙色固体CNS。

3.如权利要求2所述的一种香豆素衍生物CNS的合成方法，其特征在于，所述步骤1)中3-乙酰基-7-二乙基氨基-香豆素和对羟基苯甲醛的摩尔比为1:1.2。

4.如权利要求2所述的一种香豆素衍生物CNS的合成方法，其特征在于，所述步骤2)中化合物1和NBD-Cl的摩尔比为1:1.1。

5.如权利要求1所述的香豆素衍生物CNS在半胱氨酸检测中的应用。

6.一种特异性检测半胱氨酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的PBS缓冲溶液，配制2mM的半胱氨酸水溶液，配置2mM的权利要求1所述CNS的DMSO溶液；

(2)、取1800μL PBS缓冲溶液、200μL DMSO、0.5μL CNS的DMSO溶液于荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着半胱氨酸的加入，555nm处的荧光强度的逐渐增强；

(3)、在10个比色皿中，各加入1800μL PBS缓冲溶液、200μL DMSO、0.5μM CNS的DMSO溶液，分别加入半胱氨酸溶液的量为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1μM，5min后在荧光光谱仪上测定555nm处荧光强度为181、228.7、272.1、316.2、359.3、396.4、469.7、513.2、576.3、670.6，以半胱氨酸浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到半胱氨酸浓度的工作曲线；线性回归方程为：F-F⁰＝506.91818c+121.16818,R²＝0.98623)，c的单位为10^-6mol/L；

(4)、测定样品溶液时，将测得的荧光强度代入线性回归方程，即可求得半胱氨酸的浓度。

7.如权利要求1所述的香豆素衍生物CNS在制备细胞成像试剂中的应用。

8.如权利要求1所述的香豆素衍生物CNS在制备活体成像试剂中的应用。