[发明专利]抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201910481325.9 | 申请日： | 2019-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN110240650A | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 唐小千;战文斌;张家林;绳秀珍;邢婧 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C12N5/20;G01N33/569;A61K39/395;A61P31/14 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 王铎 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 牙鲆弹状病毒 单克隆抗体 保藏 单抗 间接酶联免疫反应 制备方法和应用 中国典型培养物 细胞膜 细胞质 分析结果显示 间接免疫荧光 杂交瘤细胞株 特异性反应 特异性结合 特异性识别 杂交瘤细胞 病变效应 病毒中和 检测试剂 结合质谱 免疫印迹 免疫制剂 荧光信号 中和活性 感染 分泌 可用 制备 病毒 浓缩 | ||
1.一种抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞株HIRRV-G-4D10，保藏号为：CCTCC NO：C201869，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为：2018年3月29日的杂交瘤细胞分泌的。
2.如权利要求1所述的抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体的抗原决定簇位于牙鲆G基因片段（61-1524 nt）基因编码的多肽区域。
3.如权利要求1所述的抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗抗能特异性识别60 kDa的天然牙鲆弹状病毒G蛋白。
4.一种如权利要求1所述抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：利用Trizol法提取弹状病毒总RNA反转后获得cDNA，以cDNA产物为模板，PCR扩增G基因片段（61-1524 nt），连接pET-28a载体构建重组表达质粒pET-28a-G，将其导入感受态大肠杆菌后经诱导表达、亲和层析纯化获得重组G蛋白，以亲和纯化的重组G蛋白作为抗原免疫Balb/c小白鼠，采用细胞融合法制备杂交瘤细胞，经过病毒微量中和实验和免疫学检测筛选方法，筛选出分泌具有病毒中和活性的抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株HIRRV-G-4D10，采用常规方法扩大培养上述所得到的杂交瘤细胞株，收集细胞培养上清液，经纯化后得到抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体。
5.如权利要求4所述的抗牙鲆弹状病毒G蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述的免疫学检测筛选方法包括间接酶联免疫法、转印免疫印迹法和间接免疫荧光法。
6.如权利要求1所述抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体在制备抗牙鲆弹状病毒免疫制剂中的应用。
7.如权利要求1所述抗牙鲆弹状病毒G蛋白的单克隆抗体在制备牙鲆弹状病毒检测试剂中的应用。
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