[发明专利]一种高纯血清白蛋白的制备方法

说明书

一种高纯血清白蛋白的制备方法，通过离子交换层析和亲和层析技术，分别对初步纯化的血清白蛋白进一步通过层析纯化获得高纯度的白蛋白溶液，并经过经典的巴氏消毒法灭活病毒处理；为应用提供更为可靠的安全保障；血清是在全血的凝集过程中，血液中的大部分凝血因子和纤维蛋白原被活化，进而形成凝集物，经过离心分离后得到的淡黄色液体成分；与血浆相比血液凝集后析出的血清中已经去除了凝血因子、纤维蛋白原等多数的其他蛋白质成分，为血清白蛋白的纯化提供了有益的帮助，克服了低温乙醇法工艺步骤复杂、操作条件要求高、操作环境恶劣、设备投入巨大和高耗能等不足，同时也避免了乙醇沉淀过程中多聚体蛋白的产生，能够极大地提高制品的质量。

技术领域

本发明涉及生物制品和血浆蛋白制品的生产技术领域，具体为一种高纯血清白蛋白的制备方法。

技术背景

血清白蛋白是血浆中的主要成分，也是血浆中含量最多的蛋白质，哺乳动物的白蛋白在基因序列、氨基酸组成以及蛋白质结构上存在较高的相似性，它们的生理功能和生理作用是基本一致的；白蛋白的分子组成差别不大，分子量约66～68千道尔顿。白蛋白的功能主要包括：(1)是维持血液的正常渗透压；(2)运输功能，白蛋白能结合血液中出现的钙离子、脂肪酸、胆红素、色氨酸以及药物等各种物质，并在这些物质的转运中起到了载体的作用；(3)白蛋白是自由基的清除剂，而且血清白蛋白能够抑制多核细胞产生氧自由基；(4)白蛋白还是机体内一种重要的营养物质。白蛋白在血浆中不断地进行代谢更新，血浆白蛋白分解产生的氨基酸，可用于合成组织蛋白，氧化分解以供应能量或转变成其它含氮物质。

纯化的白蛋白具有多种用途，其中主要是在临床上的应用，白蛋白具有提高血浆胶体渗透压、增加血容量以及用于机体白蛋白补充、提高血浆白蛋白的浓度的作用；常用于预防或抢救失血性休克、创伤性休克以及治疗低蛋白血症、肝硬化以及肾疾患所致的腹水和水肿等。

目前，国内外药用白蛋白的纯化方法主要以传统的低温乙醇法为主，该方法对设备要求高，分离步骤多、周期长、工艺条件的控制比较复杂，能源消耗巨大，而且纯化过程中常会导致多聚体的生成等。因此，对于血液来源白蛋白进行分离纯化方法的研究也一直在探索，随着层析技术和层析介质的发展，在血液制品领域也得到了较多的应用。

国外常见的层析分离技术主要采用低温乙醇法+层析法和全层析法等方式进行血液制品纯化(刘力,刘文芳.人血白蛋白分离工艺的历史沿革及发展[J].中国输血杂志.2008.21(4):323-326.)。研究发现，低温乙醇结合层析技术可使白蛋白制备条件温和、生产周期缩短、易于实现工业化生产，但是仍然是基于低温乙醇的改良方法；全层析技术虽然不依赖于低温乙醇的预处理，但是需要多个层析步骤相结合才能达到要求，对设备和技术人员的要求较高，仍未达到工业化普及应用的要求。在实际应用过程中推广的意义仍值得商榷。

发明内容

针对目前国内外血浆蛋白分离技术的现状和存在的不足，本发明的目的在于为血浆蛋白的分离纯化提供一种高效的技术方法。

本发明的技术方案如下：一种高纯血清白蛋白的制备方法，

所述方法采用血清为原料，采用盐析酸沉淀分离法对血清进行粗纯化，获得粗纯化后的血清白蛋白，粗纯化后的血清白蛋白进行层析分离获得高纯血清白蛋白；

所述粗纯化后的步骤具体包括：

第一步、粗纯化血清白蛋白溶液更换为血清白蛋白层析缓冲液：所述缓冲液换液方法，具体为将粗纯化后的血清白蛋白溶液用截留分子量为10kDa的超滤膜进行超滤换液，更换为离子交换层析上样缓冲液或亲和层析上样缓冲液，层析缓冲液换液量为5-20个血清白蛋白溶液体积，换液完成后获得含有血清白蛋白的离子交换层析上样溶液或亲和层析上样溶液；

第二步、对含有血清白蛋白的离子交换层析上样溶液或亲和层析上样溶液进行层析分离，根据紫外吸收峰收集洗脱液(含有纯化的血清白蛋白)，并更换为血清白蛋白保存缓冲液；