[发明专利]鹅细小病毒VP3蛋白抗原ELISA检测试剂盒及检测方法和应用

权利要求书

1.一种鹅细小病毒VP3蛋白抗原ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被鹅细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体的酶标板、封闭液、样品稀释液、抗原标准品、HRP标记的抗鹅细小病毒VP3单克隆抗体、洗涤液、酶底物A溶液、酶底物B溶液以及终止液，其中，所述抗原标准品为纯化的重组杆状病毒表达的形成病毒样颗粒(VLPs)的鹅细小病毒VP3蛋白。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述鹅细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体的包被量为0.01μg-0.5μg/孔。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液选自质量浓度为1-10％的牛血清白蛋白(BSA)或质量浓度为1-10％的脱脂奶粉的任一或其组合。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，样品稀释液由质量浓度为0.1-10％BSA和含有0.01-1％ProClin 300的磷酸盐缓冲液组成，其中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH7.2-7.4。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述酶底物A溶液含有质量浓度为0.016％的双氧水的乙酸钠缓冲溶液，其中，乙酸钠溶液的浓度为10g/L，pH为5.3；所述酶底物B溶液为1.7mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液；所述终止液为1mol/L的H₂SO₄溶液。

6.一种使用权利要求1-5任一所述的试剂盒检测鹅细小病毒VP3蛋白抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待检样品用样品稀释液按梯度稀释，将其加入包被抗鹅细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体的酶标板中，每孔加100μL，同时设置阳性对照组、阴性对照组和空白对照组，其中阳性对照组加入原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128系列稀释的抗原标准品各100μL，阴性对照组加入100μL阴性对照液，空白对照组加入100μL样品稀释液，每个试样和对照平行加样2-6个孔；

(2)加样完成后，将酶标板置37℃孵育1小时后，洗涤液洗板3-5次，甩干；

(3)每孔加入100μL HRP标记的抗鹅细小病毒VP3单克隆抗体，37℃育1小时，洗涤液洗板3-5次，甩干；

(4)每孔加入100μL显色液，避光显色5-10分钟后，每孔再加入50μL终止液，其中，所述的显色液由酶底物B溶液和酶底物A溶液等体积混匀制得；

(5)将酶标板置于酶标仪中，在450nm测定其光吸收值OD_450nm；

(6)结果计算与判定。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)包括定性结果或定量结果的判定，其中所述定性结果的判定：Cut off(CO值)＝阴性对照光吸收值OD_450nm×2.1倍，样品值＝样品光吸收值OD_450nm/CO值，其中，样品值>1为阳性；样品值≤1为阴性；或者，定量结果的判定：以线性曲线及方程式计算样品浓度。

8.权利要求1-5任一所述试剂盒在检测鹅细小病毒感染或者小鹅瘟疫苗产品的应用。