[发明专利]鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法

说明书

本发明公开了鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法，包括建立泰乐菌素对鸡毒支原体的耐药检测方法、制定泰乐菌素对鸡毒支原体的野生型临界值、制定泰乐菌素对鸡毒支原体的药效学临界值、制定泰乐菌素对鸡毒支原体的临床临界值以及参考CLSI公布的折点制定的流程图，符合CO_WT＞CO_PD＞CO_CL,对应的折点值应该选择野生型临界值，得到鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准；通过本发明方法可以得出鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准，能够为科学养殖提供稳定的用药数据支持，能更科学的进行指导临床用药，安全性高，能有效减缓鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药性产生，保护和维持泰乐菌素的有效性。

技术领域

本发明涉及耐药判断技术领域，尤其涉及鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法。

背景技术

感染鸡只的霉形体主要分为鸡败血霉形体和鸡滑膜霉形体两种，其中鸡败血霉形体又称鸡毒支原体，主要感染鸡和火鸡，引起鸡的慢性呼吸道系统传染病，而滑膜霉形体则感染鸡只使其出现关节炎等症状，泰乐菌素作为动物专用药，对畜禽的呼吸道疾病具有良好的治疗作用，并且不易产生药物残留，毒性作用弱，具有极高的安全性，进一步促进了其在兽医临床上的应用。

我国目前养殖业用药的不合理已经导致耐药现象的产生，耐药检测具有必要性和紧迫性，为了减缓鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药性产生，保护和维持泰乐菌素的有效性，需要对鸡毒支原体开展耐药监控措施，耐药判定标准是对细菌进行有效耐药监控的科学手段，是判断细菌耐药性的科学准则，为了监测耐药性产生，分析耐药现状和发展规律，更科学的指导临床用药，本发明提出鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法，以解决现有技术中的不足之处。

发明内容

针对上述问题，本发明提出鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法，通过本发明方法可以得出鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准，能够为科学养殖提供稳定的用药数据支持，能更科学的进行指导临床用药，安全性高，能够有效减缓鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药性产生，保护和维持泰乐菌素的有效性。

本发明提出鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法，包括以下步骤：

步骤一：建立泰乐菌素对鸡毒支原体的耐药检测方法：以金黄色葡萄球菌ATCC29213作为质控菌株，泰乐菌素作为质控药物，测定泰乐菌素对临床分离鸡毒支原体的MIC；

步骤二：制定泰乐菌素对鸡毒支原体的野生型临界值，其中野生型临界值用CO_WT表示：首先从临床感染鸡只中分离获取出鸡毒支原体107株，与实验室保存的标准菌株4株组成共111株鸡毒支原体，然后采用肉汤稀释法测定了泰乐菌素对111株鸡毒支原体的MIC值，将得到的MIC数据带入Ecoffinder软件，进行非线性回归模拟，得到不同置信区间下的野生型临界值；

步骤三：制定泰乐菌素对鸡毒支原体的药效学临界值，药效学临界值用CO_PD表示：选取了MIC₉₀的菌株进行鸡胚毒力试验，选择SPF级鸡胚进行鸡胚感染试验，将鸡胚孵化至7日龄，在强光照下找到鸡胚的胚胎并标记其与气室的位置，选择卵黄囊接种方法，接种剂量为10⁶CCU，每日观察鸡胚情况，记录每日鸡胚死亡数量，最终选择M17菌株进行PK-PD试验，制定药效学临界值，将得到的PK-PD数据利用Crystalball7软件进行蒙特卡洛模拟，选取达标率在90％以上所对应的最大MIC值为药效学临界值；