[发明专利]猪源沙门氏菌对安普霉素的耐药判定标准试验方法

说明书

本发明公开了猪源沙门氏菌对安普霉素的耐药判定标准试验方法，包括以下步骤：制定安普霉素对猪源沙门氏菌的野生型临界值、制定安普霉素对猪源沙门氏菌药效学临界值、制定安普霉素对猪源沙门氏菌用药方案、制定安普霉素对猪源沙门氏菌临床临界值以及参考CLSI的折点制定流程图，当药效学临界值＞野生型临界值＞临床临界值时耐药折点值等于野生型临界值，确定出最终的安普霉素的对沙门氏菌的耐药判定标准；通过本发明方法得出的安普霉素对沙门氏菌的耐药判定标准值，能够有效解决养殖业用药的不规范使得临床耐药现象日趋严重的问题，能够为养殖业提供稳定的用药指导，实现科学养殖目标。

技术领域

本发明涉及微生物耐药性技术领域，尤其涉及猪源沙门氏菌对安普霉素的耐药判定标准试验方法。

背景技术

沙门氏菌引起的猪消化道疾病，多发于各大养殖场，且死亡率较高，是引起仔猪死亡的主要原因之一，给养猪业的发展造成了严重的经济损失。近年来从动物和动物源食品中分离出的沙门氏菌逐渐对多种抗生素表现出敏感性下降，安普霉素作为动物专用药，被广泛的应用于畜禽的消化道疾病的预防与治疗，且由于安普霉素具有促生长的作用，也常被作为抗生素添加剂使用，当前养殖业用药的不规范使得临床耐药现象日趋严重，耐药检测具有必要性和紧迫性，因此，本发明提出猪源沙门氏菌对安普霉素的耐药判定标准试验方法，以解决现有技术中的不足之处。

发明内容

针对上述问题，本发明提出猪源沙门氏菌对安普霉素的耐药判定标准试验方法，通过本发明方法得出的安普霉素对沙门氏菌的耐药判定标准值，能够有效解决养殖业用药的不规范使得临床耐药现象日趋严重的问题，能够为养殖业提供稳定的用药指导，实现科学养殖目标。

本发明提出猪源沙门氏菌对安普霉素的耐药判定标准试验方法，包括以下步骤：

步骤一：制定安普霉素对猪源沙门氏菌的野生型临界值，野生型临界值用CO_WT 表示，对沙门氏菌进行invA基因的PCR鉴定，然后采用琼脂稀释法测定安普霉素对沙门氏菌的MIC，整理分析得到的MIC数据，用Ecoffinder软件模拟，制定出安普霉素对猪源沙门氏菌的野生型临界值；

步骤二：制定安普霉素对猪源沙门氏菌药效学临界值，药效学临界值用CO_PD 表示，对沙门氏菌进行毒力基因检测，筛选出含有毒力基因较多、毒力较强的菌株，然后进行小鼠毒力实验，最后筛选出MIC值在MIC₅₀、MIC₉₀、野生型临界值及其附近的致病性较强的菌株，选择MIC₅₀ 10#菌株进行PK-PD实验，确制定出安普霉素对猪源沙门氏菌药效学临界值；

步骤三：制定安普霉素对猪源沙门氏菌用药方案，根据步骤二中制定出的安普霉素对猪源沙门氏菌药效学临界值，再通过剂量方程，计算得到预防、治疗和根除的安普霉素给药剂量，然后根据群体混饲给药方程计算出安普霉素混饲的预防、治疗和根除剂量；

步骤四：制定安普霉素对猪源沙门氏菌临床临界值，临床临界值用CO_CL 表示，选择试验仔猪进行分组，分成空白组、阴性对照组和通过毒力实验筛选出的不同MIC组，空白组、阴性对照组和通过毒力实验筛选出的不同MIC组的组数比例为1:1:5，空白组、阴性对照组和通过毒力实验筛选出的不同MIC组的试验仔猪数量比例为1:2:2，然后根据步骤三中得到的群体混饲给药方程计算出安普霉素混饲的预防、治疗和根除剂量，对仔猪进行试验，通过临床症状评分和实时活菌菌落计数，统计临床治愈率，然后使用“WindoW”法分析计算MaxDiff和CAR，得出临床临界值的选择窗，再使用CART回归树分析出临床临界值的范围；

步骤五：根据步骤一中制定出的安普霉素对猪源沙门氏菌的野生型临界值、步骤二中制定出的安普霉素对猪源沙门氏菌药效学临界值以及步骤四中制定出的安普霉素对猪源沙门氏菌临床临界值，参考CLSI的折点制定流程图，当药效学临界值＞野生型临界值＞临床临界值时耐药折点值等于野生型临界值，确定出最终的安普霉素的对沙门氏菌的耐药判定标准。