[发明专利]一种树状大分子包裹纳米金颗粒探针及其制备和应用

权利要求书

1.一种树状大分子包裹纳米金颗粒探针的制备方法，包括：

(1)将MAL-PEG-OH溶于超纯水中，得到浓度为8-12mg/mL的MAL-PEG-OH溶液，逐滴加入G5.NH₂水溶液中反应，透析纯化，冷冻干燥，得到聚乙二醇化的树状大分子G5.NH₂-PEG-OH，其中G5.NH₂和MAL-PEG-OH的摩尔比为1：20；

(2)将步骤(1)中G5.NH₂-PEG-OH溶解于超纯水中，得到浓度为8-12mg/mL的G5.NH₂-PEG-OH溶液，滴加氯金酸水溶液，搅拌均匀，加入硼氢化钠水溶液，还原反应，透析纯化，冷冻干燥，得到树状大分子包裹纳米金颗粒{(Au⁰)₂₅-G5.NH₂-(PEG-OH)₁₄}DENPs，其中G5.NH₂-PEG-OH、氯金酸与硼氢化钠的摩尔比为1:25:122-128；

(3)将步骤(2)中{(Au⁰)₂₅-G5.NH₂-(PEG-OH)₁₄}DENPs溶解于超纯水中，得到浓度为8-12mg/mL的DENPs溶液，加入三乙胺溶液，搅拌均匀，然后滴加乙酸酐溶液，搅拌过夜，透析纯化，冻干燥，得到乙酰化树状大分子包裹纳米金颗粒{(Au⁰)₂₅-G5.NHAc-(PEG-OH)₁₄}DENPs，其中{(Au⁰)₂₅-G5.NH₂-(PEG-OH)₁₄}DENPs、三乙胺和乙酸酐的摩尔比为1:100:100～1:120:100；

(4)将Fluo-4溶解在溶剂中，得到浓度为0.8-1.2mg/mL的Fluo-4溶液，避光，经EDC活化，加入步骤(3)中{(Au⁰)₂₅-G5.NHAc-(PEG-OH)₁₄}DENPs的溶液，搅拌均匀，加入DMAP溶液，酯化反应，透析纯化，冷冻干燥，得到树状大分子包裹纳米金颗粒探针{(Au⁰)₂₅-G5.NHAc-(PEG)₁₄-(Fluo-4)₂}DENPs，其中{(Au⁰)₂₅-G5.NHAc-(PEG-OH)₁₄}DENPs、Fluo-4、EDC和DMAP的摩尔比为1:3.5:7-10:0.7-1.2。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中反应为室温反应过夜。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中G5.NH₂水溶液的浓度为8-13mg/mL。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(2)中氯金酸水溶液浓度为28-32mg/mL；硼氢化钠水溶液浓度为8-12mg/mL。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(2)中还原反应温度为室温，还原反应时间为3-5h。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(4)中溶剂为DMSO；{(Au⁰)₂₅-G5.NHAc-(PEG-OH)₁₄}DENPs的溶液的溶剂为DMSO，浓度为8-12mg/mL。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(4)中活化时间为0.3-0.6h；酯化反应温度为室温，酯化反应时间为70-75h。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)、(2)、(3)、(4)中透析为：用截留分子量为8000-14000的纤维素透析膜在超纯水2L×3中透析3天。