[发明专利]一种树状大分子包裹纳米金颗粒探针及其制备和应用

说明书

本发明涉及一种树状大分子包裹纳米金颗粒探针及其制备和应用。该制备方法包括：G5.NH₂‑PEG‑OH制备，{(Au⁰)₂₅‑G5.NH₂‑(PEG‑OH)₁₄}DENPs制备，{(Au⁰)₂₅‑G5.NHAc‑(PEG‑OH)₁₄}DENPs制备，{(Au⁰)₂₅‑G5.NHAc‑(PEG)₁₄‑(Fluo‑4)₂}DENPs制备。该方法简单，易于操作分离，原料来源商品化，具有良好的发展前景；得到的树状大分子包裹纳米金颗粒探针具有良好的水溶性和稳定性，在对T细胞进行状态监测的同时可以通过CT成像对T细胞进行追踪，具有双模态成像效果。

技术领域

本发明属于功能性纳米颗粒及其制备和应用领域，特别涉及一种树状大分子包裹纳米金颗粒探针及其制备和应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗近年来受到了极大的关注，它主要依靠激活生物体自身的免疫系统最终达到T细胞对肿瘤的杀伤目的。因此，对T细胞的监测可为肿瘤免疫治疗的疗效评估提供重要依据。经研究，钙离子信号可以描述包括T淋巴细胞在内的生物体细胞的不同生理状态，Fluo-4作为一种新型钙离子荧光探针具有荧光明亮、反应灵敏的优点，已有文献报道了一种上转换纳米颗粒表面标记了Fluo-4探针用于监测活细胞不同水平的钙信号以及用于小鼠肝组织的Ca²⁺成像(Li et al.Journal of America Chemistry Society,2015,137(9):3421-3427)。通过钙离子探针对T淋巴细胞进行钙信号监测可以有效对其功能状态进行评估。

树状大分子(dendrimer)的大小尺寸可以通过代数控制，表面丰富的官能团可被修饰及功能化，树状大分子不仅可以提高材料的溶解性，而且可以将不同的小分子化合物修饰在树状大分子表面使其发挥诊断和治疗的作用，可以用作纳米载体或支架，为多种抗肿瘤药物的传递及生物活性化合物的设计提供了可能。随着纳米技术和纳米医学的不断发展，树状大分子纳米材料在生物医学领域的各个方面表现出极大的应用潜力。已有文献报道一种树状大分子经聚乙二醇化修饰后包裹金纳米颗粒得到的纳米体系，可通过静脉注射对小鼠和大鼠进行X射线CT血池成像，也可以对裸鼠肿瘤模型进行CT成像(Peng etal.Biomaterials,2012,33(4):1107-1119)以及以G5PAMAM树状大分子为核心标记了Cy5的细胞穿透肽(ACPP)和钆离子用于MR成像和荧光成像，可监测小至200μm的肿瘤残留和转移，也可以在荧光指导下进行切除并用荧光显微镜对其进行组织病理学分析观察(Olson E Set al.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica,2010,107(9):4311-4316)。通过功能化树状大分子和金属颗粒或者小分子探针复合形成的纳米成像材料不仅表现出功能化树状大分子的特性，同时也可以集合不同成像方法的优势，通过双模态成像为诊断和效果评估提供重要依据。

检索国内外文献尚没有发现关于利用功能化树状大分子包裹纳米金颗粒同时复合钙离子探针用于T细胞CT/荧光双模态成像的研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种树状大分子包裹纳米金颗粒探针及其制备和应用，填补功能化树状大分子包裹纳米金颗粒同时复合钙离子探针的技术空白。

本发明提供一种树状大分子包裹纳米金颗粒探针的制备方法，包括：