[发明专利]一种鉴别发酵生产辅酶A过程中的菌种种属的试剂盒、方法和引物对

权利要求书

1.一种鉴别发酵生产辅酶A过程中的菌种种属的试剂盒，其包括PCR反应体系，其特征在于，所述PCR反应体系至少包括一种引物对；

所述引物对的正向引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，在所述的PCR反应体系中，所述正向引物和所述反向引物的终浓度均为0.2～1μM，优选0.3～0.5μM，更优选0.4μM。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR反应体系还包括PCR反应缓冲液、dNTP和DNA聚合酶；其中：

所述PCR反应体系中Mg²⁺的终浓度优选2mM；

所述dNTP中，dATP、dGTP、dTTP和dCTP的浓度均优选0.2mM；

所述DNA聚合酶优选Taq酶，所述DNA聚合酶的活力优选0.025U/μl。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述反应体系包括1μL浓度为10μM的上游引物、1μL浓度为10μM的下游引物、12.5μL 2×premix Taq以及9.5μL双蒸水；

较佳地，所述的试剂盒还包括阳性对照和/或阴性对照；所述的阳性对照优选停滞棒杆菌基因组DNA，所述的阴性对照优选双蒸水。

5.如权利要求1～4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述菌种选自直接发酵产辅酶A的菌种中的一种或者多种，所述菌种包括停滞棒杆菌。

6.一种鉴别发酵产辅酶A过程中的菌种种属的引物对，其特征在于，所述引物对针对停滞棒杆菌的16srDNA设计，所述引物对的正向引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

7.如权利要求6所述的引物对在鉴别发酵产辅酶A过程中的菌种种属的试剂盒或者试剂中的应用；

较佳地，所述菌种选自直接发酵产辅酶A的菌种中的一种或者多种，所述菌种包括停滞棒杆菌。

8.一种鉴别发酵产辅酶A中菌种种属的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

1)提取待检样品中的DNA；

2)利用权利要求1～5任一项所述试剂盒中的PCR反应体系扩增上述DNA得PCR产物；

3)电泳检测所述PCR产物。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中所述扩增的PCR反应程序为：(1)95℃预变性1～5min，优选3min；(2)95℃变性15～60s，优选30s：(3)59℃退火15～60s，优选30s；(4)72℃延伸60～120s，优选90s；(5)步骤(2)～(4)循环25～35次，优选30次；(6)72℃延伸5～15min，优选10min；(7)4℃终止。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤3)所述电泳为琼脂糖凝胶电泳；优选质量百分比浓度为0.8～1.2％，更优选质量百分比浓度为1％的琼脂糖凝胶电泳。