[发明专利]一种鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记及其应用有效

专利信息
申请号: 201910488480.3 申请日: 2019-06-05
公开(公告)号: CN110093447B 公开(公告)日: 2022-09-13
发明(设计)人: 沈宗芳;田波 申请(专利权)人: 中国科学院西双版纳热带植物园
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
代理公司: 昆明科众知识产权代理事务所(普通合伙) 53218 代理人: 方金敏
地址: 666300 云南省西双版纳*** 国省代码: 云南;53
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 鉴定 中药材 骨碎补 scar 分子 标记 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种高效鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记,其特征在于:该分子标记为trnS-psb30,其序列如SEQ ID No.1所示,或ndhB-trnR,其序列如SEQ ID No.2所示,或rbcL-accD,其序列如SEQ ID No.3所示,鉴定的范围包括中药材骨碎补槲蕨(Drynaria roosii)及6种混伪品团叶槲蕨(D. bonii), 石莲姜槲蕨(D. propinqua);崖姜(Pseudodrynaria coronans),中华槲蕨(D. sinica);栎叶槲蕨(D. quercifolia);川滇槲蕨(D. delavayi);大叶骨碎补(Davallia formosana)。

2.如权利要求1所述的高效鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记的构建方法,包括以下步骤:

1)对包含中药材骨碎补在内的7个物种的DNA提取后进行DNA文库构建,

2)通过二代测序获得原始reads,经组装、拼接得到21个叶绿体全基因组,对叶绿体基因进行注释后,对骨碎补和6个混伪品的叶绿体基因组进行比对,分析高变异的DNA片段,进一步比对高变异的DNA序列,筛选出3个片段作为SCAR分子标记,

3)针对筛选出的片段设计特征性扩增引物,用相对应的引物进行PCR鉴定,结果成功构建出能准确鉴定骨碎补的三个SCAR分子标记,它们分别是trnS-psb30,ndhB-trnR和rbcL-accD; 所述的特征性扩增引物如下:第一引物序列为:

正向引物S30F: TCCGACGCTTTAAACCCCT

反向引物S30R: TTGCGCAATTGTTTCTAAATTCATT;

或第二引物序列:

正向引物BRF: ATCCCATCCTTCCTTTGT

反向引物BRR: TTAGGAATATCTAACCAGAAC;

或者第三引物序列为:

正向引物LDF: GAGTATCGGTAAGGAGTTCACC

反向引物LDR: GTCTTGCTGCTCTCTATCTTTCTTC,

其中所述第一引物对为在SEQ ID No.1所示的分子标记trnS-psb30上设计的SCAR标记引物,其序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示;所述第二引物为在SEQ ID No.2所示的分子标记ndhB-trnR上设计的SCAR标记引物,其序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示;所述第三引物对为在SEQ ID No.3所示的分子标记rbcL-accD上设计的SCAR标记引物,其序列如SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示。

3.如权利要求2所述的高效鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记的应用,其特征在于,包括以下步骤:

1) 待检测样品槲蕨和其他常混用做骨碎补蕨类的根茎DNA提取,并对所得DNA进行电泳检测样本DNA的完整性;

2)用步骤1中得到的样品DNA为模板,构建专用PCR反应体系,利用权利要求2所述的三对引物其中之一进行PCR扩增;

3)利用琼脂糖凝胶电泳对步骤2得到的PCR扩增产物进行检测,由所述第一引物对扩增得到的第一PCR产物的长度在骨碎补中的为388bp, 混伪品中的长度为596-623bp;由所述第二引物对扩增得到的第二PCR产物的长度在骨碎补中的为104bp,在混伪品中没有扩增产物;由所述第三引物对扩增得到的第三PCR产物的长度在骨碎补中的为1733bp,在混伪品中没有扩增产物。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院西双版纳热带植物园,未经中国科学院西双版纳热带植物园许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910488480.3/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top