[发明专利]一种鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记及其应用

权利要求书

1.一种高效鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记，其特征在于：该分子标记为trnS-psb30，其序列如SEQ ID No.1所示，或ndhB-trnR，其序列如SEQ ID No.2所示，或rbcL-accD，其序列如SEQ ID No.3所示，鉴定的范围包括中药材骨碎补槲蕨（Drynaria roosii）及6种混伪品团叶槲蕨（D. bonii）, 石莲姜槲蕨（D. propinqua）;崖姜（Pseudodrynaria coronans），中华槲蕨（D. sinica）;栎叶槲蕨（D. quercifolia）;川滇槲蕨（D. delavayi）;大叶骨碎补（Davallia formosana）。

2.如权利要求1所述的高效鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记的构建方法，包括以下步骤：

1）对包含中药材骨碎补在内的7个物种的DNA提取后进行DNA文库构建，

2）通过二代测序获得原始reads，经组装、拼接得到21个叶绿体全基因组，对叶绿体基因进行注释后，对骨碎补和6个混伪品的叶绿体基因组进行比对，分析高变异的DNA片段，进一步比对高变异的DNA序列，筛选出3个片段作为SCAR分子标记，

3）针对筛选出的片段设计特征性扩增引物，用相对应的引物进行PCR鉴定，结果成功构建出能准确鉴定骨碎补的三个SCAR分子标记，它们分别是trnS-psb30，ndhB-trnR和rbcL-accD; 所述的特征性扩增引物如下：第一引物序列为：

正向引物S30F: TCCGACGCTTTAAACCCCT

反向引物S30R: TTGCGCAATTGTTTCTAAATTCATT；

或第二引物序列：

正向引物BRF: ATCCCATCCTTCCTTTGT

反向引物BRR: TTAGGAATATCTAACCAGAAC；

或者第三引物序列为：

正向引物LDF: GAGTATCGGTAAGGAGTTCACC

反向引物LDR: GTCTTGCTGCTCTCTATCTTTCTTC，

其中所述第一引物对为在SEQ ID No.1所示的分子标记trnS-psb30上设计的SCAR标记引物，其序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示；所述第二引物为在SEQ ID No.2所示的分子标记ndhB-trnR上设计的SCAR标记引物，其序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示；所述第三引物对为在SEQ ID No.3所示的分子标记rbcL-accD上设计的SCAR标记引物，其序列如SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示。

3.如权利要求2所述的高效鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1） 待检测样品槲蕨和其他常混用做骨碎补蕨类的根茎DNA提取，并对所得DNA进行电泳检测样本DNA的完整性；

2）用步骤1中得到的样品DNA为模板，构建专用PCR反应体系，利用权利要求2所述的三对引物其中之一进行PCR扩增；

3）利用琼脂糖凝胶电泳对步骤2得到的PCR扩增产物进行检测，由所述第一引物对扩增得到的第一PCR产物的长度在骨碎补中的为388bp, 混伪品中的长度为596-623bp；由所述第二引物对扩增得到的第二PCR产物的长度在骨碎补中的为104bp，在混伪品中没有扩增产物；由所述第三引物对扩增得到的第三PCR产物的长度在骨碎补中的为1733bp，在混伪品中没有扩增产物。