[发明专利]一种鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记及其应用

说明书

本发明属于物种鉴定领域，具体涉及一种鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记、分子标记的构建方法、特征性扩增引物及其应用。本发明公布了鉴定中药材骨碎补正伪品的SCAR分子标记的构建方法，三个SCAR分子标记，以及对应的特征性扩增引物，鉴定方法及应用。本发明SCAR分子标记更加经济方便，不用经历PCR产物纯化、测序等步骤，能大大节约鉴定成本；更加准确和稳定；不需要分类学背景的专家、不需要经历次级代谢产物提取与检测分析等步骤，就能对中药村进行更加快捷高效的鉴定。本发明可以实现骨碎补药材的准确鉴定，突破了传统药材识别的局限，解决了骨碎补药材混伪品滥用的问题，有利于提高用药的安全性和有效性，有较高的应用价值。

技术领域

本发明属于物种鉴定领域，具体涉及用于鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记，分子标记的构建方法，特征性扩增引物及其应用。

背景技术

中药材的准确鉴定是中医药事业运行和发展的基本环节。中药材质量不稳定仍是中药发展面临的一个重大问题，造成这个问题的一个主要原因是同种药材来源复杂，特别是中药材在传承过程中存在同物异名、同名异物等现象药导致同一种药材的使用植物种类繁多、来源复杂。很多情况下，多种同属植物作为一种药材使用，而其鉴定与质量控制都尚难尽如人意。由于药材之间形态、结构极近似，性状、显微(组织构造和粉末)等传统鉴定方法有比较大的难度，即使是有丰富经验的专业人员或药师，也费时费力，并且不能保证精确无误。因而，有必要建立更加准确、快速、可靠的多来源药材鉴定和质量评价体系。

槲蕨(Drynaria roosi)为槲蕨科(Drynariaceae)植物。其干燥根状茎为我国的传统中药材骨碎补；柚皮苷为主要药效成分，《中华人民共和国药典》规定干燥品中不得低于0.5％。市场上出现的骨碎补混伪品药材只含有微量甚至不含柚皮苷，主要包括团叶槲蕨(D.boni),石莲姜槲蕨(D.propinqua)；崖姜蕨(Pseudodrynaria coronans)，中华槲蕨(D.sinica)；栎叶槲蕨(D.quercifolia)；川滇槲蕨(D.delavayi)；大叶骨碎补(Davaliaformosana)。它们在形态上非常相似，很难区分，经常会被当作中药材骨碎补使用。错误的使用可能降低用药的有效性并存在用药安全的隐患。同一科属的蕨类植物具有相似的形态学特征，需要经验丰富的分类专家才能准确鉴定，且鉴定过程极为繁琐。

随着分子生物学技术的发展，基于DNA序列变异的分子生物学手段是中药材鉴定的重要方法，在中药材的鉴定中广泛应用。近年来，随着DNA条形码技术的发展，DNA条形码已经发展成为物种鉴定的重要工具，在中药材的鉴定中应用广泛。然而，传统DNA条形码存在以下问题：1、这些传统DNA条形码在不同植物类群中的鉴定能力存在较大差异，没有一个DNA条形码能适用于所有植物类群，针对某一特定类群，需要进行重新筛选，而已有可作为DNA条形码筛选的基因较少，2、单一DNA条形码所包含的变异位点较少，且变异位点多为单核苷酸突变位点，所合成引物往往表现扩增效率和测序成功率低，其物种鉴定能力有限，3、传统DNA条形码需经过DNA测序和序列比对实现物种鉴定，成本较高。通过比较不同物种的叶绿体全基因组序列，可以发掘叶绿体基因组在不同物种间的特征性区域，从而可以开发出特定物种的序列特征性扩增区域(SCAR)标记，用于特定物种的鉴定。相对于RAPD、SSR等传统的分子标记，本发明开发的SCAR分子标记具有所用引物较长且引物序列与模板DNA完全互补，可在严谨条件下进行扩增，扩增产物特异性强，检测结果稳定性好、可重复性强。由于上述优点，SCAR分子标记成为目前中药材分子鉴定的重要工具。

发明内容

针对以上技术问题，本发明旨在提供一种鉴定中药材骨碎补的SCAR分子标记，分子标记的构建方法，特征性扩增引物及其应用。

本发明的技术方案如下：