[发明专利]以SMNP作为对照检测SMN基因拷贝数的方法

说明书

本发明涉及一种体外检测运动神经元存活基因(Survival of Motor Neuron，SMN)拷贝数的方法，所述方法以SMNP作为对照基因，操作简便，结果准确。本发明还提供了检测SMN拷贝数的试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种体外检测运动神经元存活基 因(Survival of Motor Neuron，SMN)拷贝数的方法及检测试剂盒。

背景技术

脊髓性肌萎缩症，Spinal muscular atrophy(SMA)，是一种较为常见 的常染色体隐性遗传病。SMA的携带率和发病率在各人种中基本相同， 携带者频率1/40～1/60，新生儿中发病率约4～10/100,000。

SMA是一种神经肌肉紊乱疾病，以脊髓前角运动神经元细胞退行性 变为特征，会导致肢体和躯干出现对称性、进行性的肌无力和肌萎缩 (Neurotherapeutics.2008；5:499-506)。根据患者的发病年龄、运动能力 和寿命等，国际SMA联合会将典型SMA分为I型、II型和III型等3 个型别(Neuromuscular Disorders.1991；1(2):81；Neuromusculardisorders.1992；2(5-6):423-428)。

SMA I型，6个月前发病，也被称为Werdnig-Hoffmann病、婴儿期 SMA等。该型占所有SMA患者人数的约50％。该型患儿有严重的进行 性的肌无力与肌张力减弱，一般不能独坐，如果没有治疗一般生存期不会 超过2年。

SMA II型，6至18个月发病，也被称为青少年型SMA、中间型SMA 等。有一些能坐，部分能站，但是大多不能行走，常出现呼吸功能障碍。 一般寿命超过两岁，部分可存活至青春期甚至更长。

SMA III型，18个月后发病，也被称为Kugelberg-Welander病、轻 型SMA等，有很强的临床异质性，通常能发育，但是婴儿期近端肌肉通 常会出问题，多数患者能行走，只是有轻微无力。青春期病情有可能出现 反复，寿命多正常。

在典型的SMA I、II和III型之外还有0型和IV型。

SMA 0型，先天型，有严重的关节挛缩、面瘫和呼吸衰竭，常出现

SMA IV型，成人型，一般于35岁以后发病，主要表现为缓慢逐渐 发生的上下肢近端无力和肌肉萎缩，成年期都能够行走。

SMA最主要的致病基因定位于五号染色体5q13.2区域。该区域整体 呈现为一个巨大的反向重复结构，这也导致该区域内容易发生非等位基因 间同源重组，造成基因缺失或重复等异常。

在该区域上的两个高度同源的基因被命名为运动神经元存活基因 (survivalmotor neuron,SMN)。研究发现，靠近端粒的SMN1是SMA 的致病性基因。如果两个SMN1基因拷贝全部缺失或带有致病性突变则 会导致SMA；靠近中心体的SMN2不是SMA致病性基因，但其拷贝数 与SMA临床表现严重程度相关(Cell 80:155-165,1995)。

SMN基因全长20kb，含有9个外显子(1、2a、2b、3-8)。SMN1和 SMN2基因序列在包括启动子在内的全部基因区域高度一致。目前发现 SMN1和SMN2基因只有5个碱基的区别(rs1454173648，INS6-45，G/A； rs4916，Exon 7+6，第840碱基，C/T；rs212214，INS7+100A/G； rs1244569826，INS7+215，A/G；rs1323191655，Exon8+245G/A)，它们 分布在内含子6到外显子8之间的区域内。SMN1和SMN2基因所有外 显子序列仅存在两个碱基不同，其一是外显子7中的一个不同碱基，为同 义突变；其二是外显子8中的一个不同碱基，位于终止密码子后，对蛋白 编码无影响。因此，SMN1和SMN2所编码的氨基酸序列是完全一致的。