[发明专利]一种小鼠红细胞悬液的制备方法在审
申请号: | 201910492387.X | 申请日: | 2019-06-06 |
公开(公告)号: | CN110157667A | 公开(公告)日: | 2019-08-23 |
发明(设计)人: | 杨夏 | 申请(专利权)人: | 广州鸿泉生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/078 | 分类号: | C12N5/078;A01N1/02 |
代理公司: | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人: | 王霞 |
地址: | 510000 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 小鼠红细胞 保存 上清液 悬液 制备 生理盐水 摇匀 红细胞保存液 无菌生理盐水 成年小鼠 体积分数 小鼠血液 混合液 体积比 采集 血液 重复 | ||
1.一种小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
a.采集多只成年小鼠的血液各0.2~0.4ml,将小鼠血液与红细胞保存液混合均匀后保存,其中,小鼠血液与红细胞保存液的体积比为1:1.5~2.5,保存温度为2~8℃;
b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀,然后在转速为1400~1600rpm的条件下离心4~6min,弃去上清液;
c.重复步骤b两次到四次后,再加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀,然后在转速为1400~1600rpm的条件下离心10min,弃去上清液;
d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2%的小鼠红细胞悬液然后保存,保存温度为2~8℃。
2.根据权利要求1所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,所述红细胞保存液为阿氏液或CPDA-1。
3.根据权利要求2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,所述阿氏液由以下方法制备得到:
称取葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、柠檬酸0.05g以及氯化钠0.42g,混合后加入100ml的试剂瓶中,向试剂瓶中加入蒸馏水至100ml,加热溶化既得所述阿氏液,保存温度为4℃,有效保存时间为180天,其中,加热温度为110~120℃,加热时间为10min。
4.根据权利要求2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,所述CPDA-1由以下方法制备得到:无水葡萄糖25.5g、枸橼酸钠.2H2O26.3g、枸橼酸.H2O3.27g、磷酸二氢钠2.22g以及腺嘌呤173.0g,混合后加入1000ml的试剂瓶中,向试剂瓶中加入蒸馏水至1000ml,加热溶化既得所述CPDA-1,保存温度为4℃,有效保存时间为180天,其中,加热温度为110~120℃,加热时间为6min。
5.根据权利要求1所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,所述生理盐水由以下方法制备得到:
称取氯化钠8.5g且溶于1000ml蒸馏水中即可得到。
6.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,小鼠血液与红细胞保存液的体积比为1:2。
7.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,步骤b中和步骤C中所述转速为均1500rpm。
8.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,步骤c中所述重复步骤b三次。
9.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法,其特征在于,所述步骤b中和步骤C中离心时间为5min。
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