[发明专利]用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统

权利要求书

1.一种同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法，包括以下步骤：

（1）在调节好pH值的胶体金溶液中分别标记胎儿纤维连接蛋白抗体1和胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1；

（2）采用低温超速离心去除未标记蛋白/抗体及未充分标记的胶体金，将两种标记物沉淀混合，加入pH值为7.0—7.4的金标复溶液进行复溶，混匀得到用于金标垫制备的金标液；

（3）利用喷金仪将步骤（2）制备的金标液喷涂于亲水性的未处理金标垫上，置于37℃烘干，得到标记的金标垫。

2.根据权利要求1所述的同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述胎儿纤维连接蛋白抗体1的标记方法包括以下步骤：

（101）在1ml胶体金加入0.1mol/L碳酸钾溶液调节pH至胎儿纤维连接蛋白抗体1最适标记pH，该pH值为6.9—7.4；

（102）混匀后，边迅速搅拌边逐滴加入6µg浓度为0.1mg/ml的胎儿纤维连接蛋白抗体1，反应30min；

（103）再加入50µl 10% BSA，搅拌均匀，反应15min后，再加入20µl 5%PEG20000，反应15min。

3.根据权利要求1所述的同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1的标记方法包括以下步骤：

（111）在1ml胶体金加入0.1 mol/L碳酸钾溶液调节pH至胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1最适标记pH，该pH值为7.0—7.7；

（112）混匀后，边迅速搅拌边逐滴加入6µg浓度为0.1mg/ml的胰岛素样生长因子结合蛋白-1抗体1，反应30min；

（113）再加入50µl 10% BSA，搅拌均匀，反应15min后，再加入20µl 5%PEG20000，反应15min。

4.根据权利要求1所述的同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述金标复溶液的组成包括：

PB缓冲液：基质成分，pH值为7.0—7.4；

10%蔗糖及5%海藻糖；

1%BSA；

0.5%PVP；和

0.5%Tween20。

5.利用权利要求1至4任一项所述的同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法制备的金标垫。

6.一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，包括试剂盒和检测设备；

所述试剂盒主要包括检测卡、标准曲线对照表和样本稀释液，所述检测卡包括卡壳和设置在卡壳中的试条，所述试条包括衬底、依次粘附在衬底上的样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫，所述金标垫采用权利要求5所述的金标垫实现两种蛋白的同时检测；所述标准曲线对照表设置在条形码或SD卡上，条形码印在卡壳的表面；

所述检测设备包括光源系统、光电检测系统、主电路控制板、热敏打印机和显示屏，光源系统包括冷光源和光电传感器，主电路控制板包括DC-DC电路、放大电路和控制电路；检测设备通过机械运动部件，将反应完全的金免疫层析试纸原理的检测卡传输至设备内部，携带样本信息和项目信息的条形码通过45度角的单面玻璃，经条码扫描头进行信息读取，让设备对IGFBP-1和fFN项目判读，运用特定光源扫描NC膜，获得光吸收电信号，然后对光吸收电信号进行分析，定量地对靶向待测物进行分析，实现对试剂盒中两种蛋白的定量检测，为诊断胎膜早破与预测早产提供参考依据。

7.根据权利要求6所述的用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，其特征在于，所述卡壳包括相互卡接的上卡壳、下卡壳，上卡壳上开有位于样品垫上部的加样孔、位于NC膜上部的观测口，下卡壳的内表面设置有用于放置试条的卡槽。