[发明专利]用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统

说明书

本发明公开了一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白‑1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统，包括试剂盒、检测设备；试剂盒运用双抗体夹心法免疫层析技术，与配套仪器使用，实现对孕妇阴道分泌物或阴道流出液中胰岛素样生长因子结合蛋白‑1与胎儿纤维连接蛋白的定量检测，为诊断胎膜早破与预测早产提供参考依据。还公开了一种同时测定胰岛素样生长因子结合蛋白‑1和胎儿纤维连接蛋白含量的金标垫的制备方法及其制备的金标垫，所述金标垫采用两种抗体标记胶体金并混合复溶液喷金的方法实现两种蛋白的同时检测，实现了一次取样同时定量检测两个指标，操作快速简单，检测准确度高。

技术领域

本发明涉及医学检测领域，特别是涉及一种用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统。

背景技术

临产前的胎膜破裂称为胎膜早破(PROM)，孕龄37孕周的胎膜早破又称为早产(未足月)胎膜早破。胎膜早破是围生期最常见的并发症，可导致早产率升高，围生儿病死率增加，宫内感染率及产褥感染率均升高，妊娠满37周后的胎膜早破发病率约为10％，妊娠不满37周的胎膜早破发病率约为2.0％—3.5％。PROM可并发早产、脐带脱垂及母儿感染，一旦发生，若处理不当可危及母儿生命，因此准确及时诊断PROM至关重要。胰岛素样生长因子结合蛋白-1(insulin-like growth factor binding protein-1，简称IGFBP-1)主要存在羊水中，是孕期羊水中的一种标志性蛋白质。当发生胎膜破裂时，羊水从胎膜的破口中漏到宫颈阴道中，其中含有的IGFBP-1成为胎膜早破诊断的标志，由于其在羊水中的含量极高，为母亲血液中的100—1000倍，因此灵敏度非常高，可以检测出常规手段无法测出的微量羊水，解决了隐匿性胎膜早破和高位破水难以检测的问题。

早产是指在满28孕周至37孕周之间的分娩，国内早产占分娩总数的5％—15％，约15％的早产儿死于新生儿期。早产防控是降低围生儿死亡率和提高新生儿素质的主要措施之一。国外学者建议将早产定义时间上限提前到妊娠20周。胎儿纤维连接蛋白(fetalFibronectin，fFN)，是子宫绒毛膜细胞外的基质成分，存在于绒毛膜与蜕膜之间，主要由滋养层细胞产生。由于孕21周以后，绒毛膜与蜕膜的融合阻止了fFN的释放，而使正常的孕妇在22—35孕周时，fFN的含量极低，只有在绒毛膜与蜕膜分离、绒毛膜与蜕膜界面的细胞外基质遭到机械损伤或蛋白水解酶的降解时，fFN才可见于宫颈阴道分泌物中。因此，在孕22-35周之间，宫颈阴道分泌物中fFN的水平与是否发生早产有很大的相关性。国内早产占分娩总数的5％—15％，约15％的早产儿死于新生儿期，因此，早产防控是降低围生儿死亡率和提高新生儿素质的主要措施之一。

胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白这两种物质都在子宫发生收缩、胎盘和蜕膜发生剥离时释放至孕妇阴道的物质，当孕妇阴道中上述两种物质出现异常升高，可预测早产早破的发生。目前检测胎膜早破准确性最高的方法为检测是否出现胰岛素样生长因子结合蛋白-1，准确率可达90％；胎儿纤维连接蛋白检测在生物标志物中阴性预测值极高，因此极具价值，美国妇产科医师协会(ACOG)推荐为早产诊断常规项目。

如上所述，目前临床上已经存在对早产和胎膜早破诊断的方法，但是，胎膜早破和早产是密切关联的，可又相对独立的产科常见症状，因为胎膜早破是导致早产的部分原因，而出现胎膜早破并不意味着就会早产，因此临床上对早产和胎膜早破都需要进行风险评估。但是目前临床诊断方法都是多次取样并分开进行的，这样既增加了操作繁琐程度，同时因为对孕妇多次取样，会刺激孕妇发生宫缩以及增加感染的几率，进而增加早产和胎膜早破的风险。

目前，IGFBP-1诊断胎膜早破特异性高，但仅限于检测胎膜完整程度，即使胎膜完整，孕妇是否有发动早产的风险仍是未知结果；fFN阴性预测值高，但阳性时无法判断fFN来自于羊水还是绒毛膜蜕膜间隙，无法判断是否是胎膜早破导致的早产风险。虽然IGFBP-1与fFN均为临床指南推荐性指标，但是将两种物质的诊断联合应用并实现一次取样同时定量检测蛋白含量的技术还未出现。