[发明专利]一种微载体细胞三维复合体冷冻保存液及应用

权利要求书

1. 一种微载体细胞三维复合体的冷冻保存液，其特征在于所述冷冻保存液中包括的成分及含量为：0%~90%基础培养基、5%~90%胎牛血清（FBS）、5%~10%二甲基亚砜（DMSO）以及1μg/mL~500 μg/mL抗冻糖蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种微载体细胞三维复合体的冷冻保存液，其特征在于所含成分比例优选为：0%~50%基础培养基、40%~90% FBS、10% DMSO以及10 μg/mL~100 μg/mL抗冻糖蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种微载体细胞三维复合体的冷冻保存液，其特征在于所含成分比例最优选为：0%基础培养基、90% FBS、10% DMSO以及50 μg/mL抗冻糖蛋白。

4.根据权利要求1所述的一种微载体细胞三维复合体的冷冻保存液，其特征在于所述的微载体细胞三维复合体中的细胞包括但不局限于人肝脏来源的细胞，例如原代人肝细胞、永生化人肝细胞、人肝脏肿瘤细胞及人肝窦内皮细胞等。

5.根据权利要求1所述的一种微载体细胞三维复合体的冷冻保存液，其特征在于所述的微载体细胞三维复合体中的微载体是任何可以商业获得的适合细胞培养用的微载体，从结构上包括实心微载体和大孔微载体，从基质材质上包括但不局限于明胶微载体、交联葡聚糖微载体、交联纤维素微载体和高分子合成材料的微载体等。

6.一种微载体细胞三维复合体的冷冻保存方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）待微载体上细胞生长至所需密度，收获微载体细胞三维复合体，用基础培养基洗去溶液中脱落细胞；

（2）将洗好的微载体细胞三维复合体与权利要求1~3任一所述的微载体细胞三维复合体的冷冻保存液混合均匀，分装入冻存管中，冷冻保存液与微载体细胞的体积比例为10:1至4:1；

（3）将分装好的冻存管在4℃、40 rpm摇床混匀平衡20 min，然后进行缓慢降温至-80℃；

（4）需要长期保存时，待冻存管在-80℃冰箱冷冻过夜后，转入液氮中长期保存。

7.权利要求1~3任一项所述的一种微载体细胞三维复合体的冷冻保存液的应用。