[发明专利]一种高纯人凝血因子IX制剂的生产方法

权利要求书

1.一种高纯人凝血因子IX制剂的生产方法，其特征在于包含以下步骤：

血浆冷沉淀的去除：以新鲜冷冻人血浆为原料，经融浆，混浆，连续离心等工序去除血浆中的冷沉淀；

凝胶批吸附：血浆温度控制在10℃，按照1.0g干凝胶/L血浆，向去冷沉淀血浆中加入平衡后的DEAE A-50凝胶，搅拌吸附45min后关闭搅拌，凝胶吸附后的血浆使用小型封闭过滤器进行过滤，收集吸附后的A-50凝胶；

装柱洗脱：将吸附后的A-50凝胶装填在小型XK16/20层析柱内，装填好的层析柱使用AKTA层析系统进行在线洗涤，洗涤液流速为2ml/min，冲洗时间60min，洗涤后的A-50凝胶切换洗脱液进行在线洗脱，洗脱液流速为2ml/min，待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于500mAu后停止洗脱，使用小型0.45um滤芯过滤；

S/D灭活：温和搅拌下将配置好的S/D灭活液缓慢加入过滤后的洗脱液中，添加完毕后搅拌30min，调整液温为24℃，灭活6h；

亲和层析：将非Ca2+依赖型IX因子免疫亲和凝胶12ml装填在小型XK16/20层析柱中，装填好的层析柱使用AKTA层析系统泵入含20mmol/L的Tris，0.1mol/L的氯化钠，pH为7.4的缓冲液平衡10个柱体积，S/D灭活后料液流入层析柱，上样流速为2ml/min，上样完成后使用两种不同的洗涤缓冲液分3次进行洗涤,洗涤液流速为2ml/min，第1次洗涤：使用含20mmol/L的Tris，0.1mol/L的氯化钠，pH为7.4的洗涤缓冲液洗涤100ml，第2次洗涤：使用含20mmol/L的Tris，0.6mol/L的氯化钠，0.05％Tween-80，pH为7.4的洗涤缓冲液洗100ml，第3次洗涤：使用含20mmol/L的Tris，0.1mol/L的氯化钠，pH为7.4的洗涤缓冲液洗涤50ml，洗涤后的层析柱使用含10mmol/L的Tris，0.2mol/L甘氨酸，pH为5.5的洗脱缓冲液进行洗脱，洗脱液流速为2ml/min；

配液：向洗脱液中加入含蔗糖5％，赖氨酸3％，精氨酸3％，甘氨酸3％，枸橼酸钠20mmol/L的混合保护剂10ml，使用稀释液对洗脱液进行稀释，调节活力为30IU/ml，pH 7.5，使用0.45um滤头过滤；

纳滤除病毒：采用Planova 20N纳滤膜进行除病毒过滤；

分装冻干：按规格分装，冷冻干燥。