[发明专利]无血清的脐带间充质干细胞培养基

权利要求书

1.一种无血清的脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，包括DMEM/F12、1～20ng/mL重组人成纤维细胞生长因子、1～20μg/mL重组人表皮生长因子、1～20μg/mL胰岛素、1～10mML-谷氨酰胺、50～200μM 2-巯基乙醇、20～50nM亚硒酸钠、10～30μg/ml转铁蛋白、10～100mg/mL人血清白蛋白、50～200μg/mL纤粘连蛋白、50～200ug/ml黄芪多糖APS、10～50mg/L IL-3、10～50mg/L IL-6、45～55μg/L IL-r、10～50mg/L人参提取物、10～50mg/L玫瑰提取物、10～50mg/L茉莉花提取物、5～8mM维生素C。

2.根据权利要求1所述的无血清的脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，培养基中含有5～15ng/mL重组人成纤维细胞生长因子、5～15μg/mL重组人表皮生长因子、5～18μg/mL胰岛素、5～8mM L-谷氨酰胺、80～150μM 2-巯基乙醇、25～40nM亚硒酸钠、15～25μg/ml转铁蛋白、30～80mg/mL人血清白蛋白、80～150μg/mL纤粘连蛋白、80～150ug/ml黄芪多糖APS。

3.根据权利要求2所述的无血清的脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，培养基中含有10ng/mL重组人成纤维细胞生长因子、10μg/mL重组人表皮生长因子、10μg/mL胰岛素、5mML-谷氨酰胺、100μM 2-巯基乙醇、30nM亚硒酸钠、25μg/ml转铁蛋白、50mg/mL人血清白蛋白、100μg/mL纤粘连蛋白、100ug/ml黄芪多糖APS、30mg/L IL-3、30mg/L IL-6、50μg/L IL-r、30mg/L人参提取物、30mg/L玫瑰提取物、30mg/L茉莉花提取物、5mM维生素C。

4.一种脐带间充质细胞的传代培养及扩增的方法，具体步骤如下：

a.把保存在冻存管中的脐带间充质干细胞从液氮中取出，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动2min溶解，同时预热权利要求1-3所述无血清的脐带间充质干细胞培养基；

b.把经37℃解冻后的脐带间充质干细胞吸到装有8mL权利要求1-3所述无血清的脐带间充质干细胞培养基的15ml离心管中，再用1ml权利要求1-3所述无血清的脐带间充质干细胞培养基漂洗1次冻存管，尽量减少细胞数量损失，漂洗液一起加到离心管中，轻轻吹匀，避免产生气泡，然后800g离心5分钟；

c.弃上清液，分别加2mL预热的权利要求1-3所述无血清的脐带间充质干细胞培养基，轻轻吹匀，保证细胞完全悬浮起来；将重悬的细胞接种到T25的培养瓶中，再加入3-4ml权利要求1-3所述无血清的脐带间充质干细胞培养基，再把细胞摇均匀，保证所有的细胞能够均匀的分布；

d.将复苏的细胞放入37℃、5％C02培养箱中培养；

e.细胞贴壁后换权利要求1-3所述无血清的脐带间充质干细胞培养基，去除死细胞；培养瓶中的细胞覆盖率达到80％90％时按8000个/平方厘米的细胞浓度传代至细胞培养板中，细胞培养板使用的生长培养基为权利要求1-3所述无血清的脐带间充质干细胞培养基。