[发明专利]一种分离鉴定黄水中多糖的方法

权利要求书

1.一种分离鉴定黄水中多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)黄水前处理：对黄水进行离心、超滤、醇沉处理，收集沉淀并干燥，得到黄水粗多糖；

(2)黄水粗多糖除杂：除去黄水粗多糖中的蛋白质、色素及杂质；

(3)黄水粗多糖纯化：利用离子交换层析柱和凝胶层析纯化黄水粗多糖，得到黄水多糖；

(4)黄水多糖理化性质分析：通过化学处理和波谱分析测定纯化后的多糖组分的理化性质；

步骤(1)具体包括：用离心机对黄水进行至少一次离心处理，收集上清液并超滤，然后对黄水超滤液进行醇沉处理，再次离心，收集沉淀并干燥；其中，首次离心的条件为：离心温度为0℃-4℃、离心力为4000g-6000g、离心时间为15-30min，后续离心处理的条件为：离心温度为0℃-4℃、离心力为8000g-10000g、离心时间为5-25min；所述超滤截留组分的分子量大于3000Da；

步骤(2)具体包括：向黄水粗多糖中加入Sevag试剂，振摇，离心，收集最上层糖液，回收剩余样品，重复上述步骤直至中间层无白色蛋白质出现，用洗糖试剂洗去糖液中的色素及杂质，然后将糖液转移至透析袋透析，真空冷冻干燥滤液得到除杂后的黄水粗多糖；

步骤(3)中采用DEAE FF离子交换层析柱纯化，洗脱液为超纯水以及0.05-0.5mol/LNaCl，流速为0.5-0.6mL/min；

测定纯化后的多糖理化性质的方法包括：

将纯化后的多糖组分与不同分子量的葡聚糖标准品通过糖柱色谱柱串联凝胶柱分析，测定多糖的纯度及分子质量；

对纯化后的多糖组分进行乙酰化和/或甲基化处理，然后通过气相色谱-质谱联用仪进行组成分析；以及，利用红外光谱和核磁共振分析多糖结构；

所述糖柱色谱柱串联凝胶柱分析时的条件为：流动相为0.04-0.05mol/L NaCl，流速为0.8-1.0mL/min，柱温为40℃；利用气相色谱-质谱联用仪采用以下条件分析：RXI-5SIL MS色谱柱；起始温度100-120℃，以3℃/min升温至250℃，保持5min；进样口和检测器温度保持250℃，载气为氦气，流速为0.8-1.0mL/min。

2.如权利要求1所述的分离鉴定黄水中多糖的方法，其特征在于，所述步骤(2)中黄水粗多糖与Sevag试剂的体积比为1:1-5；所述洗糖试剂为甲醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的分离鉴定黄水中多糖的方法，其特征在于，所述步骤(3)中采用Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析，洗脱液为超纯水，流速为0.4-0.5mL/min。

4.如权利要求1所述的分离鉴定黄水中多糖的方法，其特征在于，还包括所述黄水多糖抗氧化活性的测定。