[发明专利]一种分离鉴定黄水中多糖的方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体公开了一种分离鉴定黄水中多糖的方法，通过离心、超滤、醇沉、除杂等前处理初步提纯多糖，离子交换柱和凝胶层析纯化黄水粗多糖，通过甲基和/或乙酰化、分子量测定处理以及波谱分析解析纯化黄水多糖的理化性质，对该黄水多糖进行抗氧化能力测定，测得该多糖具有较强的清除1,1‑二苯基‑2‑三硝基苯肼(DPPH)自由基能力，表明白酒酿造副产物黄水中含有生物活性物质多糖，为黄水的深层次开发或利用提供了理论基础。

技术领域

本发明涉及一种分离鉴定多糖的方法，尤其适用于黄水中多糖的分离鉴定。

背景技术

白酒是我国传统蒸馏酒，在白酒酿造过程中，微生物代谢生成的水与酒醅中的水逐渐沉降，将酒醅中有机酸、单宁、色素、可溶性淀粉、蛋白质、还原糖及其他香味物质溶于其中，并且沉积到窖池底部，形成了棕黄色的粘稠液体——黄水。因此，黄水中含有大量残留的可溶性淀粉(2.0-4.5g/mL)。淀粉经过酶或微生物作用得到进一步降解，产生了多糖、双糖及单糖等物质，可溶性的糖类物质最终溶解在黄水中。因此，对黄水的研究，不仅对于提高酒质、提升生产工艺等具有重要意义，还能为合理开发黄水资源提供技术依据。

黄水中含有较多的糟醅残渣，这些物质与生产过程中的水分共同形成的物质一般较为粘稠，不能直接用于化学仪器检测，必须通过一定的预处理方法对固体沉淀处理，提取其中的有效成分，才能分析出多糖并鉴定。如中国专利201210369333公开了一种分析黄水中组分的方法，包括离心黄水收集沉淀、对沉淀进行超声破碎处理、对超声破碎后的混合液离心萃取处理、将萃取后的物质利用全二维气相色谱仪和飞行时间质谱仪综合分析，得出了黄水中的主要成分。

多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由许多相同或不同的单糖以α/β-糖苷键连接而成的天然高分子多聚物。活性多糖是指具有某种特殊生理活性的多糖化合物，如免疫活性、抗炎活性、抗氧化活性、降血脂活性等。活性多糖广泛存在于植物和微生物的细胞壁中，如灵芝多糖、枸杞多糖、猴头菇多糖、海带多糖、石斛多糖等。

粗多糖的分离纯化较常用的有离子交换柱层析和葡聚糖凝胶色谱柱层析。离子交换分离的原理是根据被分离物质和固定相上带电荷基团相结合的强弱能力的不同来进行分离，固定相上带电荷基团通过静电作用与带有相反电荷的被分离物相结合，当用离子性溶剂洗脱时，洗脱液能够将固定相上的样品离子交换下来。而不同分子量的多糖所带电荷有差异，因此洗脱剂会在不同的洗脱阶段将多糖分离开。

凝胶色谱分离多糖主要是依据分子筛的阻通，大分子物质体积较大，不易进入凝胶颗粒内部的微孔中，只能分布在颗粒之间随着洗脱剂移动，因此经过色谱柱时首先被洗脱下来。而小分子物质的体积较小，除了在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒内部，因此在色谱柱上的运动途径相对较长，在大分子物质之后被洗脱下来。

现有对黄水的研究集中在黄水中的有机物质和微生物等方面，对黄水中多糖的研究较少，更多的是对黄酒中的多糖进行了分离和鉴定。如“黄酒中多糖的提取和分析”介绍了黄酒中多糖的提取和分析方法，其确定了黄酒多糖的最佳提取工艺，分析纯化后多糖的化学组分为中性糖含量为89.6％、糠醛酸含量为0.48％、蛋白质含量为4％(参见“工业微生物”，2018,48(1),1-7,)。

现有技术大都关注黄水中的有机物质和微生物等方面的研究，尚无关于黄水中生物活性多糖的研究。

发明内容

本发明的目的在于结合现有技术的不足，提供一种分离鉴定黄水中多糖的方法，采用离心、超滤、醇沉、离子交换柱层析、葡聚糖凝胶柱层等方法，对黄水进行预处理、分离并纯化多糖，采用化学方法和波谱学方法判定多糖的结构。

本发明的又一个目的在于提供一种制备多糖的方法，该制备方法以白酒酿造副产物黄水为原料。

本发明解决其技术问题所采用的分离鉴定黄水中多糖的方法，包括以下步骤：