[发明专利]单核细胞增生李斯特菌血清型4h多重PCR检测试剂盒

说明书

本发明提供一种单核细胞增生李斯特菌血清型4h多重PCR检测试剂盒，所述试剂盒中包括基因lmo1210检测引物以及基因xysn_1693检测引物。本发明建立了利用两对引物快速检测单核细胞增生李斯特菌血清型4h的多重PCR方法，具有特异性好，灵敏度高，检测速度快，易于操作和结果判定的优点，适用于多种来源样品的检测。

技术领域

本发明涉及一种生物检测试剂盒，特别是涉及一种单核细胞增生李斯特菌血清型4h的多重PCR检测试剂盒。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种重要的食源性人兽共患病原菌，其对食品安全及人类健康的危害已经引起很多国家的高度重视。单核细胞增生李斯特菌引起的人和动物的李斯特菌病具有低发病率、高致死率的特点。据统计，人李斯特菌病发病率约每百万人0.1～11.3例，死亡率为20％～30％。

单核细胞增生李斯特菌包括4个进化谱系，14种血清型。其中1/2a、1/2b和4b是引起李斯特菌病的主要血清型，而4h是我国发现的一种新的李斯特菌血清型。血清型4h的单核细胞增生李斯特菌通常具有超强毒力，李斯特菌病的爆发多与超强毒力菌株的出现有关，因此，建立单核细胞增生李斯特菌尤其是针对血清型4h的快速、有效的检测方法对于李斯特菌的监测与控制是非常必要的。

目前食品中单核细胞增生李斯特菌的检测方法通常参照食品安全国家标准GB4789.30-2016，在样品增菌培养及选择性培养后进行传统的生化鉴定实验。该方法能够较为准确地检出单核细胞增生李斯特菌，但同时也存在着耗时耗力，且不能快速区分超强毒力单核细胞增生李斯特菌的不足。

因此，提供一种新的快速便捷的检测方法十分必要。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种单核细胞增生李斯特菌血清型4h的多重PCR检测试剂盒，用于解决现有技术中无法直接检测单核细胞增生李斯特菌血清型4h的问题，该方法操作简单，准确度高，耗时短，满足现在食品安全检测的需要。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明的第一方面提供了基因lmo1210以及基因xysn_1693在制备检测单核细胞增生李斯特菌血清型4h检测试剂盒中的用途。

将基因lmo1210以及基因xysn_1693用于制备单核细胞增生李斯特菌血清型4h检测试剂，是指将基因lmo1210以及基因xysn_1693作为检测靶标应用于单核细胞增生李斯特菌血清型4h的检测。

本发明的一些实施方式中，基于所述基因lmo1210以及基因xysn_1693的序列，筛选特异性针对基因lmo1210以及基因xysn_1693扩增引物对从而作为增生李斯特菌血清型4h检测试剂。

上述用途应当是基因lmo1210以及基因xysn_1693共同作用的结果，并非是单个基因分别发挥作用。

本发明提供一种单核细胞增生李斯特菌血清型4h的多重PCR检测试剂盒，所述试剂盒中包括基因lmo1210检测引物以及基因xysn_1693检测引物。

优选地，所述基因lmo1210检测引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物。

进一步地，基因lmo1210检测引物扩增区域核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。检测片段长度为211bp。

优选地，所述基因xysn_1693检测引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的反向引物。

进一步地，基因xysn_1693检测引物扩增区域核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。检测片段长度为429bp。