[发明专利]一种L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法在审
| 申请号： | 201910502423.6 | 申请日： | 2019-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN110093327A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 齐勇;董亢;濮梦华;张涛;夏伟;刘彬 | 申请（专利权）人： | 安徽国星生物化学有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N1/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 合肥顺超知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34120 | 代理人： | 周发军 |
| 地址： | 243000 安徽省马鞍*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 发酵 草铵膦 发酵工艺 复合酶 还原酶 还原型 补料 诱导 谷氨酸 生物技术领域 大肠杆菌 葡萄糖 二级种子液 催化合成 催化效率 火焰环境 进气流量 生物发酵 发酵液 诱导剂 补加 富含 罐压 菌株 生产工艺 能耗 节约 生产 | ||
1.一种L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将富含大肠杆菌的二级种子液在火焰环境下接入到生物发酵罐中；
2)采用间歇加入的方式向发酵罐中加入补料，控制空气进气流量在3vvm，发酵液的pH值为6.9，罐压为0.05MP，发酵的培养温度为35℃，发酵5-7h后补加补料，当菌的OD长到50以上时，开始降温诱导并加入诱导剂IPTG，发酵的诱导温度为18℃，发酵3-4天，得谷氨酸还原酶和葡萄糖还原酶。
2.如权利要求1所述的L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，步骤1)中，富含大肠杆菌的二级种子液是由一级种子液在摇床37℃下培养5个小时得到的，生物发酵罐为10L全自动不锈钢发酵罐，其径高比为1：3，总容积为10L，装液系数为70％，操作无死角。
3.如权利要求1所述的L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，步骤2)中，发酵用空气经空气过滤器除菌处理后进入发酵罐体。
4.如权利要求1所述的L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，步骤2)中，诱导之前，初始补料速度为1.2ml/min，之后每小时增加0.2ml/min，最高补料速度不超过2.0ml/min，诱导之后，初始补料速度为0.8ml/min，之后每两个小时增加0.1ml/min，最高不超过1.8ml/min，发酵过程始终都在搅拌条件下进行，搅拌速度为400-900r/min。
5.如权利要求1-4任一项所述的L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，所述补料包括如下质量份数的原料：酵母粉70-80份、蛋白胨20-30份、甘油200-400份。
6.如权利要求1-4所述的L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，所述补料包括如下质量份数的原料：玉米浆90-110份、蛋白胨20-30份、甘油200-400份。
7.如权利要求5所述的L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，所述补料包括如下质量份数的原料：酵母粉75份、蛋白胨25份、甘油300份。
8.如权利要求6所述的L-草铵膦产双还原型复合酶的发酵工艺方法，其特征在于，所述补料包括如下质量份数的原料：玉米浆100份、蛋白胨25份、甘油400份。
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