[发明专利]一种活性化T淋巴细胞培养液及其活性化T淋巴细胞的制备方法

说明书

一种活性化T淋巴细胞培养液及其活性化T淋巴细胞的制备方法，属于细胞培养技术领域。包括AT细胞的培养和AT细胞的收获两大步骤。上述一种活性化T淋巴细胞培养液及其活性化T淋巴细胞的制备方法，其通过使用Lymactin‑T抗CD3单克隆抗体配合IL‑2，IL‑6的方法，效率极高的激活T淋巴细胞并诱导期快速增殖；并使用PMA和离子霉素配合的方法激活T细胞；该方法具有效率高，纯度高等优点。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体为一种活性化T淋巴细胞培养液及其活性化T淋巴细胞的制备方法。

背景技术

T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞，T细胞活化技术，是将患者血液抽出体外，在实验室中进行扩增和激活，最后将这些数量高、超高活性的T细胞回输回患者体内，激活全身的体液免疫和细胞免疫系统。现有活性化T淋巴细胞的制备，普遍存在效率低，纯度不高等问题。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种活性化T淋巴细胞培养液及其活性化T淋巴细胞的制备方法的技术方案，其通过使用Lymactin-T抗CD3单克隆抗体配合IL-2，IL-6的方法，效率极高的激活T淋巴细胞并诱导期快速增殖；并使用PMA和离子霉素配合的方法激活T细胞；该方法具有效率高，纯度高等优点。

所述的一种活性化T淋巴细胞培养液，其特征在于由以下物质组成：

5-7ml 的ALyS505N-0；

70-90ul的5x10^5 IU/ml IL-2；

15-25ul的5x10^5 IU/ml IL-6；

3-5ml自体血清。

所述的一种活性化T淋巴细胞培养液，其特征在于由以下物质组成：

6ml 的ALyS505N-0；

80ul的5x10^5 IU/ml IL-2；

20ul的5x10^5 IU/ml IL-6；

4ml自体血清。

所述的一种活性化T淋巴细胞培养液的活性化T淋巴细胞的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将血浆处理后收集白细胞，将1-10ml白细胞移入50ml细胞试管中；

2）准备T75细胞培养瓶,对白细胞进行2小时的PBMCs培养；

3）准备T225细胞培养瓶作为AT 培养瓶，向AT培养瓶里加入10-15ml的5ug/mlLymactin-T，扣上盖子，前后温柔的摇晃AT培养瓶直到液体覆盖整个底部，放在室温静置培养2小时；

4）步骤2）PBMCs的2小时培养结束后，用显微镜确保细胞黏附在培养瓶的底部，温柔的前后摇晃T75培养瓶使非黏附的细胞悬浮，转移细胞悬液到50ml试管中备用；使用下记方法洗涤AT培养瓶；用移液器重新使50ml试管中的细胞悬浮，平均的把2-10ml细胞悬液转移到每个AT培养瓶中；

4）在一个50ml试管中配制好AT培养液，AT培养瓶中加入培养液直到40ml；扣上AT培养瓶的盖子，温柔的摇匀，把AT培养瓶放入培养箱培养7天，37℃，5%CO₂；

5）AT细胞的收获：

a．准备新的50ml试管，制备培养液A：室温下向试管中加入43-46ml ALyS505N-0培养液、48-52ul 的2ug/ml 离子霉素和48-52ul的200ng/ml PMA；

b．准备新的250ml试管，用显微镜观察检测所有的AT培养瓶，再次确认内毒素检测结果为阴性，将所有培养液倒入250ml试管中；