[发明专利]一种光热响应的杂化纳米疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 201910504656.X | 申请日： | 2019-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN110179973B | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 陈刚;周昕;白亚南 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | A61K39/085 | 分类号： | A61K39/085;A61K41/00;A61K9/127;A61K47/04;A61P31/04 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 光热 响应 纳米 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种光热响应的杂化纳米疫苗，其特征在于，所述光热响应的杂化纳米疫苗包括磁性介孔硅MSN、吲哚菁绿ICG及金黄色葡萄球菌外膜囊泡OMV15，所述磁性介孔硅装载吲哚菁绿形成内核，所述金黄色葡萄球菌外膜囊泡包裹于内核表面，所述金黄色葡萄球菌包括S.aureus BW15，所述光热响应的杂化纳米疫苗的制备方法，包括以下步骤：
（1）OMV15的制备：挑取菌株为S.aureus BW15的单菌落金黄色葡萄球菌在含有250 mLLB培养基的1 L三角瓶中37℃分别摇菌至对数期，OD600为1，菌液6000 g离心20 min，去除沉淀，上清经0.45 μm滤膜过滤后，滤液用100 kDa超滤管浓缩至20~30mL，再用0.22 μm的滤膜过滤，滤液经超速离心150,000 g，3 h，4℃，沉淀即OMV15，用PBS洗三次，150,000 g，3 h，4℃，去除杂蛋白；
（2）ICG/MSN的制备：配置1mg/mL的 ICG母液，并稀释至12 μg/mL，取1mL ICG稀释液，加入20 mg MSN，避光室温搅拌2 h，磁力架分离IGG/MSN；
（3）OMV15/ICG/MSN的制备：分别取步骤（1）中的OMV15与步骤（2）中ICG/MSN混合，质量比为1.5:1，用挤出仪挤出7次，滤膜孔的大小为150 nm，磁力架分离包裹好的OMV15/ICG/MSN；
所述金黄色葡萄球菌外膜囊泡OMV15大小为95.77 nm，OMV15/ICG/MSN变为负电位-15.9mV。
2.一种光热响应的杂化纳米疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）OMV15的制备：挑取菌株为S.aureus BW15的单菌落金黄色葡萄球菌在含有250 mLLB培养基的1 L三角瓶中37℃分别摇菌至对数期，OD600为1，菌液6000 g离心20 min，去除沉淀，上清经0.45 μm滤膜过滤后，滤液用100 kDa超滤管浓缩至20~30mL，再用0.22 μm的滤膜过滤，滤液经超速离心150,000 g，3 h，4℃，沉淀即OMV15，用PBS洗三次，150,000 g，3 h，4℃，去除杂蛋白；
（2）ICG/MSN的制备：配置1mg/mL的 ICG母液，并稀释至12 μg/mL，取1mL ICG稀释液，加入20 mg MSN，避光室温搅拌2 h，磁力架分离IGG/MSN；
（3）OMV15/ICG/MSN的制备：分别取步骤（1）中的OMV15与步骤（2）中ICG/MSN混合，质量比为1.5:1，用挤出仪挤出7次，滤膜孔的大小为150 nm，磁力架分离包裹好的OMV15/ICG/MSN。
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