[发明专利]一种基于三维微载体细胞培养的原位传代方法

权利要求书

1.一种基于三维微载体细胞培养的原位传代方法，包括如下步骤：将种子微载体接入新的微载体；所述种子微载体为培养有待传代细胞的微载体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述种子微载体中的细胞密度为1万-100万细胞/mg微载体；

进一步地，所述种子微载体中的细胞密度为12万-50万细胞/mg微载体或者15万-50万细胞/mg微载体；

和/或

所述种子微载体与所述新的微载体的比例为0.0002-200mg种子微载体/mg新的微载体；

进一步地，所述种子微载体与所述新的微载体的比例为1-3mg种子微载体/20mg新的微载体或2-6.7mg种子微载体/100mg新的微载体。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法为基于三维细胞微载体培养的动态原位传代方法，包括如下步骤：

(A1)制备新的微载体悬液：将新的微载体置于内置叶轮细胞培养瓶中，按照1～2000μL：1mg微载体的比例加入细胞培养基，静置或搅拌0h以上，得到所述新的微载体悬液；

(A2)制备种子微载体悬液：所述种子微载体中的细胞密度为1万-100万细胞/mg微载体，用细胞培养基将所述种子微载体重悬至0.1-50mg/mL，得所述种子微载体悬液；

(A3)接种：将(A2)中制备的所述种子微载体悬液混入(A1)装有所述新的微载体悬液的所述内置叶轮细胞培养瓶中，所述种子微载体与所述新的微载体的比例为0.0002-200mg种子微载体/mg新的微载体，加入细胞培养基调整微载体与培养基的比例至1mg：1～1000μL，将所述内置叶轮细胞培养瓶置于搅拌器上并放入培养箱中进行搅拌，搅拌时长为0至100小时；

(A4)培养：继续搅拌，完成所述动态原位传代。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法为基于三维细胞微载体培养的静态原位传代方法，包括如下步骤：

(B1)制备种子微载体悬液：所述种子微载体中的细胞密度为1万-100万细胞/mg微载体，用细胞培养基将所述种子微载体重悬至0.1-50mg/mL，得所述种子微载体悬液；

(B2)接种：将(B1)中制备的所述种子微载体悬液滴加到新的微载体中，所述种子微载体与所述新的微载体的比例为0.0002-200mg种子微载体/mg新的微载体，混匀后放入培养箱孵育0.5-24h；

(B3)培养：加入细胞培养基继续培养，即完成所述静态原位传代。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(A1)中，置于所述内置叶轮细胞培养瓶中的所述新的微载体和所述细胞培养基的配比为100mg微载体/10mL细胞培养基；和/或，将所述新的微载体和所述细胞培养基置于所述内置叶轮细胞培养瓶中后静置0.1-24h；

和/或

步骤(A2)中，所述种子微载体中的细胞密度为15万-50万细胞/mg微载体；和/或，所述种子微载体悬液中所述种子微载体的含量为1-10mg/mL；

和/或

步骤(A3)中，所述种子微载体与所述新的微载体的比例为1-10mg种子微载体/100mg新的微载体；和/或，加入所述细胞培养基调整微载体与培养基的比例至1-10mg：1mL；和/或，所述搅拌速度为1rpm-200rpm，所述搅拌为恒速搅拌或变速交替式或变数循环式搅拌，搅拌方向可为顺时搅拌，逆时搅拌或交替方向的搅拌；

进一步地，所述搅拌为变速循环顺时搅拌，参数为60rmp5min，20rpm20min共循环24小时。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(B1)中，所述种子微载体中的细胞密度为12万-50万细胞/mg微载体；和/或，所述种子微载体悬液中所述种子微载体的含量为5-15mg/mL；

和/或

步骤(B2)中，所述种子微载体与所述新的微载体的比例为1-3mg种子微载体/20mg新的微载体；和/或，所述孵育时间为0-24h。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述细胞为贴壁动物细胞。