[发明专利]一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒及上皮间质混合型及PD‑L1阳性循环肿瘤细胞的富集检测方法，该试剂盒，包括试剂盒盒体以及试剂盒盒盖，试剂盒盒体内壁紧贴有保温隔水层，试剂盒盒体内底部设有冷盒，冷盒上设置有底盒，底盒内设置有多个放置槽和多个放置孔，多个放置槽内设置有螺旋样品室和微流控芯片，多个放置孔内设置有多个试剂瓶，多个试剂瓶形成试剂瓶组。该试剂盒设计组合合理、使用存放节约、运输方便的可以直接用于常温环境使用保存与运输，确保了上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒中的试剂耗材组合用于上皮型、上皮间质混合型与间质型的CTCs富集捕获与检测过程的有效性。

技术领域

本发明涉及试剂盒以及上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测领域，具体涉及一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒及上皮间质混合型及PD-L1阳性循环肿瘤细胞的富集检测方法。

背景技术

循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells，CTCs)为自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞，是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。CTCs主要是由上皮型CTCs、上皮间质混合型CTCs和间质型CTCs亚群组成的异质性种群。

肿瘤转移扩散是导致癌症进展与相关死亡的主要原因。CTCs在肿瘤形成远端转移的过程中扮演着重要的角色。恶性肿瘤患者血液中若含有较多数量的CTCs，则预示着预后不良与肿瘤转移的概率增加。CTCs诱发的肿瘤转移主要涉及上皮间质转化(Epithelial toMesenchymal Transition，EMT)与间质上皮转化(Mesenchymal to EpithelialTransition，MET)两个动态过程，其中EMT过程涉及肿瘤细胞从原发灶脱落入血形成具有转移侵袭性的上皮间质混合型CTCs，MET过程参与了远端转移灶的形成、稳定和增殖过程。在上述CTCs发生EMT与MET的过程中伴随着上皮型、上皮间质混合型和间质型不同表型间的CTCs转变，且在肿瘤发生发展的不同阶段(早期、进展期与转移期)中对于上述不同亚群的CTCs检测具有不同的临床应用价值：上皮型CTCs的检测分析可应用于肿瘤的早期辅助鉴别诊断与预后评估等方向；上皮间质混合型与间质型CTCs检测分析可指导进展期和转移期的肿瘤患者的转移复发监测和疗效监测等。因此，以无创的方式获取与检测肿瘤患者外周血中的不同亚群的CTCs对肿瘤患者临床肿瘤早期辅助诊断、预后判断、肿瘤治疗疗效监测与评价、肿瘤转移复发监测以及早期预警、个体化治疗指导和改善肿瘤患者的生存状态都有着重要的临床应用价值。

CTCs在外周血中的数量非常稀少，仅占外周血白细胞的1/10⁶～1/10⁷，因此对于不同类型CTCs的有效富集与检测技术瓶颈更高、难度更大，一直影响着CTCs的实际应用。目前CTCs的富集检测主要采用以下2种形式：①依赖抗EpCAM富集捕获CTCs与抗细胞角蛋白(CK8、CK18和CK19等)抗体及CD45鉴别检测CTCs的方法(代表为CellSearch系统)，此种方法仅针对上皮型CTCs的富集与检测，无法检测间质表型与上皮间质混合型的CTCs；②不依赖捕获标记物富集CTCs(膜过滤法、梯度离心法等)，虽然克服了富集捕获标志物的限制，但是此种方式的富集特异性不高，会漏检具有特殊生物物理特性的CTCs，且仍存在无法检测上皮间质混合型的CTCs。因此常规CTCs的富集与检测往往局限于单一类群的CTCs的富集与检测，无法检测上皮间质混合型的CTCs，由于CTCs的异质性、动态演化等原因影响，单一类型的富集检测方法很大程度限制了CTCs的临床应用效果。

为克服现有CTCs富集检测技术缺陷局限，本发明设计了一种设计组合合理、使用存放运输节约方便的上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，确保上皮间质混合型、上皮型与间质型的CTCs进行富集捕获与检测试剂组合性能，从而为基于CTCs的肿瘤的精准治疗临床应用提供更加可靠的诊断、治疗和预后判断证据奠定基础。

发明内容