[发明专利]耐药表型快速检测药敏平板及耐药表型快速检测方法

权利要求书

1.一种耐药表型快速检测药敏平板，用于耐药表型快速检测，其特征在于：包括无菌的药敏平皿(1)和所述药敏平皿(1)内的M-H琼脂(2)；

所述药敏平皿(1)是底面为平面的敞口器皿，底面为连续整面，边缘外凸或平直，相当直径为6～15cm，器皿的深度大于3.5mm；

所述M-H琼脂(2)厚度均匀地铺设于药敏平皿(1)的底面上，厚度为3.0±0.1mm。

2.根据权利要求1所述的药敏平板，其特征在于：设有与所述药敏平皿(1)配套的平皿盖(3)，平皿盖在所述药敏平皿上将药敏平皿完全覆盖，所述药敏平皿(1)和平皿盖(3)为无色透明的玻璃或有机玻璃材质。

3.根据权利要求1所述的药敏平板，其特征在于：所述药敏平皿(1)为直径9.0±0.2cm，深度3.5～7mm的底面圆形器皿。

4.一种耐药表型快速检测的方法，其特征在于：按照下述的步骤顺序进行：

第一步：制作耐药表型快速检测药敏平板：

在无菌消毒的药敏平皿内制作M-H琼脂，使M-H琼脂在药敏平皿内各处的厚度为3.0±0.1mm，制成薄型琼脂平板tMHA，放4℃环境保存一天以上备用；

第二步：涂布菌液；

取出tMHA待温度稳定，根据不同的耐药表型将对应的细菌菌液浓度调整到2.0～3.0麦氏单位，制备好的菌液在15分钟内完成tMHA琼脂表面的涂布；

第三步：贴药敏纸片；

涂布完菌液的tMHA在第3～5分钟内贴上抗菌药物纸片，在涂布菌液的tMHA表面贴上符合CLSI标准的与耐药表型检测相应的抗菌药物纸片，抗菌药物纸片距离tMHA边缘不低于20mm，多片抗菌药物纸片相互之间的中心距离不低于24mm；

第四步：判断：

根据不同的耐药表型，将药敏平皿在35±1℃环境下经过4～6小时的培养，测量相应抗菌药物纸片的抑菌环，再与相应的耐药表型的判断标准进行比较，根据耐药表型判断标准来判断是否为相应的耐药表型，符合耐药表型判断标准的就判定为耐药表型阳性，不符合耐药表型判断标准的就判定为耐药表型阴性；

根据操作方法，所述的耐药表型判断标准如下：

如果用大肠埃希菌ATCC25922涂布tMHA平板，则沾取了测试菌的药敏纸片抑菌环与不沾取测试菌的药敏纸片抑菌环直径之差大于5mm为阳性，小于3mm为阴性；

如果直接用待测菌涂布tMHA平板，则加待检测酶的酶抑制剂药敏纸片和不加待检测酶的酶抑制剂药敏纸片的抑菌环直径之差大于5mm为阳性，小于3mm为阴性。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在第一步中，药敏平板的制作方法为：取每38g M-H琼脂干粉加1000ml去离子水，加热使M-H琼脂干粉完全溶解，调节溶液pH值至7.3±0.1，然后在121℃高压环境进行15分钟灭菌；将液态的M-H琼脂倒入无菌药敏平皿上，水平放置使M-H琼脂各处厚度为3.0±0.1mm，待凝固后制成tMHA。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在第二步中，将对应的细菌菌液浓度调整到3.0麦氏单位。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：在第二步中，将对应的细菌菌液浓度调整到2.0麦氏单位。

8.根据权利要求4、6或7所述的方法，其特征在于：在第二步中涂布的具体方法为，将无菌棉拭子浸入所述细菌菌液中，旋转数次，在液面上方的管壁按压去除棉拭子里多余的菌液，然后将棉拭子在整个tMHA表面来回涂布三次，每次旋转平板60度，以确保菌液均匀分布；最后在平板琼脂的边缘涂一圈。