[发明专利]用于I亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种用于I亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒及检测方法，试剂盒包括PCR引物对和探针，所述PCR引物对的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述探针的序列如SEQ ID NO:3所示。检测的方法包括：以待检I亚群血清8型禽腺病毒样品DNA为模板，利用上述PCR引物对和探针进行荧光定量PCR扩增，采集荧光信号。本发明最低可以检测模板浓度为10copies/μL，比常规的PCR方法高出约100倍，其他常见的家禽病毒均无特异性扩增，没有发现交叉反应，批内和批间变异系数均小于1％。

技术领域

本发明属于病毒核酸检测技术领域，具体涉及一种用于I亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒及检测方法。

背景技术

禽腺病毒(Fowl adenovirus，FAdV)是一种可以感染各种日龄家禽的急性、高度接触传染性病原。该病毒属于腺病毒科禽腺病毒属，分为3个亚群。其中，I亚群FAdV被分成5个毒种及12个血清型。该亚群FAdV可引起不同日龄禽类发生多种疾病，包括包涵体肝炎、心包积液-肝炎综合症和肌胃糜烂症等疾病。FAdV广泛流行于世界各地，给养禽业造成了巨大的经济损失。Wang等人(Wang J,Wang S,Zou K,et al.Variant Serotypes of FowlAdenovirus Isolated from Commercial Poultry Between 2007and 2017in SomeRegions of China[J].Avian Dis.2018,62(2):171-176)对我国2007-2017年间FAdV的流行情况进行了详细分析，研究结果表明2007-2014年血清11型禽腺病毒(FAdV-11)为国内优势毒株，2014年6月至2016年血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为国内优势毒株，而2017年上半年血清8型禽腺病毒(FAdV-8)为国内优势毒株。自FAdV-8广泛流行以来，尚无一种有效快速的诊断方法。目前主要通过接种SPF鸡胚和普通PCR扩增等传统方法检测FAdV-8感染。由于病料接种SPF鸡胚繁毒周期长且操作复杂，同时普通PCR方法很难监测到病毒含量很低的病料样品，因此急需建立一种操作简便、快速、灵敏高、特异性好的检测技术。

发明内容

有鉴于此，有必要针对现有技术存在的问题，提供一种用于I亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒及检测方法。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一种用于I亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒，包括PCR引物对和探针，所述PCR引物对的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述探针的序列如SEQ ID NO:3所示。

进一步的，所述探针的5’端结合有FAM，3’端结合有BHQ。

进一步的，所述试剂盒还包括含有FAdV-8hexon基因的阳性重组质粒标准品。

第二个方面，本发明还提供了上述试剂盒在制备检测或诊断I亚群血清8型禽腺病毒的制剂中的用途。

第三个方面，本发明提供一种用于I亚群血清8型禽腺病毒检测的方法，包括：以待检I亚群血清8型禽腺病毒样品DNA为模板，利用上述PCR引物对和探针进行荧光定量PCR扩增，采集荧光信号。

进一步的，在所述荧光定量PCR扩增的反应体系中，每20μL中含有如SEQ ID NO:1所示的引物6pmol，如SEQ ID NO:2所示的引物6pmol，所述探针4pmol。

在本发明的一种实施例中，所述荧光定量PCR扩增的反应体系为：2×Master Mix(Probe qPCR)10μL，Rox reference dye(50×)0.04μL，DNA模板2μL，SEQ ID NO:1引物(6pmol)0.2μL，SEQ ID NO:2引物(6pmol)0.2μL，SEQ ID NO:3探针(4pmol)0.1μL，用灭菌双蒸水补至20μL。