[发明专利]一种非洲猪瘟病毒的可视化LAMP检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测非洲猪瘟病毒的LAMP引物组，其特征在于：所述引物组为以下六条引物：

ASFV-LP-F3-3：5'-CTAAATACTATCAGCCCCCTCTTG-3'，

ASFV-LP-FIP-3：5'-ATTGCGTCTACTGGGGCGTCCAGTTTTGGCGAGCGCTTTATCACCATA-3'，

ASFV-LP-FLOOP-3：5'-CACCAAATCCTTTTGCGATGC-3'，

ASFV-LP-BIP-3：

5'-CGCTTTAAACCATGGTTTATCCCAGTTTTTCAGGGGTTACAAACAGGTTATTGA-3'，

ASFV-LP-BLOOP-3：5'-GAAATCTCGCTCACGAATAATG-3'，

ASFV-LP-B3-3：5'-GGGTCACCTGCGTTTTATGGA-3'。

2.一种检测非洲猪瘟病毒的LAMP试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒主要由非洲猪瘟病毒可视化LAMP检测试剂盒组成；

所述非洲猪瘟病毒可视化LAMP检测试剂盒其成分如下：1080μlASFV恒温扩增反应液、60μlBst DNA聚合酶、1ml矿物油、100μl LAMP ASFV阳性对照、100μlLAMP ASFV阴性对照；

所述恒温扩增反应液中主要包括扩增非洲猪瘟病毒p72基因的LAMP引物、扩增缓冲液和显色染料；其中扩增非洲猪瘟病毒p72基因的LAMP引物预混液的终浓度分别为：

0.08μM ASFV-LP-F3/ASFV-LP-B3、0.8μM ASFV-LP-FIP/ASFV-LP-BI、

0.8μM ASFV-LP-FLOOP/ASFV-LP-BLOOP。

4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的检测反应条件为：64℃，45分钟；终止反应。

5.如权利要求2所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述试剂盒的使用方法为：

1)常规样品核酸提取：

a、常规样品核酸提取，制备得到非洲猪瘟病毒可视化LMAP检测的模板即样品DNA模板，待用；

2)非洲猪瘟病毒检测：

a.向对应的反应管中加入制备好的样品DNA模板1μl，然后向阴性对照管内加入1μlLAMP阴性对照，最后向阳性对照管内加入1μl LAMP阳性对照；

反应体系：

b.将分别加入待检核酸样品、LAMP阴性对照与LAMP阳性对照的反应管加热；

所述加热反应管采用水浴锅、金属浴或者常规PCR仪中的一种；

所述水浴锅或没有热盖的金属浴则需向每管表面加入20μl矿物油，采用带热盖的金属浴或者常规PCR仪则无需加入矿物油；

c.预热好相应的仪器，64℃反应45分钟，反应结束后及时取出反应管，或者保持在室温或者4℃，反应结束后即可直接肉眼观察判定结果；

d.结果判定：

1)阴性对照样品管反应结束后颜色为橘黄或者橘色，阳性对照样品管变为粉红色，若二者均成立才可判定试验成立，否则试验无效；

2)试验成立时，若待检样品管颜色变为和阳性对照样品管颜色一致或接近的粉红色则判为阳性。