[发明专利]一种非洲猪瘟病毒的可视化LAMP检测试剂盒

说明书

本发明公开一种非洲猪瘟病毒的可视化LAMP检测试剂盒。该试剂盒包含有6条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。本发明的试剂盒以中性红染料替代了传统钙黄素，不仅使可视化直观效果更加鲜明，将反应时间缩短至45分钟，而且还实现了由试剂盒直接提供反应预混缓冲液的需求，这样进一步简化了操作程序，更加有效避免污染发生。应用本发明的试剂盒进行检测，能够肉眼直接直观判断，具有良好的特异性、敏感性和稳定性。

技术领域

本发明涉及一种可视化LAMP试剂盒，具体地说是一种非洲猪瘟病毒的可视 化LAMP检测试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(英文名称：African Swine fever，简称：ASF)是由非洲猪瘟 病毒(英文名称：African Swine fever virus，简称：ASFV)感染家猪和各种 野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)引起一种急性、出血性、烈性传染病。世界 动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，该病也是我国重点防范的一 类动物疫情。其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100％，临床 表现为发热(达40～42℃)，心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性 或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血，非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似，只能依靠实验室监测确诊。

传统的实时荧光qPCR检测试剂盒不仅需要昂贵的实时荧光定量PCR仪器， 而且需要依赖仪器的Ct值或者溶解曲线方能够做出结果判断，需要严格培训的 专业技术人员方可以掌握此复杂的操作过程，不利于在基础实验室或者养殖场、 屠宰场等现场使用。其它的一些等温扩增方法，例如重组酶聚合酶扩增(RAA) 法等尽管设备相对简单化一些，但是还都无法实现可视化检测，仍依赖专业技 术人员操作和对结果的分析判断。由于非洲猪瘟疫情紧急，传播渠道众多，更 多是发生在散养户或者小规模猪场(我国规划化养猪场占比尽在15％左右)，这 些场所条件简陋，不具备高要求的设备和专业化的技术人员，再有非洲猪瘟现 在没有商品化疫苗，所以，早期现场诊断对疫情的防控突显十分重要。抗原和 抗体等免疫学监测方法在疫病检测时间上都相对滞后，敏感度也相对核酸检测 低。非洲猪瘟病毒核酸在感染24小时就可以检测出来，故此，开发能够满足现 场病毒核酸检测需求的方法是及时发现疫情的最有效手段。本发明的非洲猪瘟 病毒可视化LAMP检测试剂盒完全能够满足现场检测，尤其是设备相对简陋的小 型猪场或者屠宰场等基础单位的迫切需求。

发明内容

本发明的的目的在于提出一种非洲猪瘟病毒的可视化LAMP检测试剂盒，以 解决上述所述的缺点。

为实现上述目的，本发明所述一种检测非洲猪瘟病毒的LAMP引物组，所述 引物组为以下六条引物：

ASFV-LP-F3-3：5'-CTAAATACTATCAGCCCCCTCTTG-3'，

ASFV-LP-FIP-3：

5'-ATTGCGTCTACTGGGGCGTCCAGTTTTGGCGAGCGCTTTATCACCATA-3'，

ASFV-LP-FLOOP-3：5'-CACCAAATCCTTTTGCGATGC-3'，

ASFV-LP-BIP-3：

5'-CGCTTTAAACCATGGTTTATCCCAGTTTTTCAGGGGTTACAAACAGGTTATTGA-3'，

ASFV-LP-BLOOP-3：5'-GAAATCTCGCTCACGAATAATG-3'，

ASFV-LP-B3-3：5'-GGGTCACCTGCGTTTTATGGA-3'。

本发明所述一种检测非洲猪瘟病毒的LAMP试剂盒，所述试剂盒包括上述引 物组。

所述试剂盒主要由非洲猪瘟病毒可视化LAMP检测试剂盒组成；