[发明专利]同时检测HBA1/2和HBB基因突变的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于同时扩增HBA1/2和HBB基因片段的引物组，所述引物组包括如下引物对：

(1)SEA引物对；

(2)4.2引物对；

(3)WT引物对；

(4)3.7引物对；和

(5)HBB引物对；

其中所述SEA引物对分别位于基因组hg19 chr16:215396-234699上下游；所述4.2引物对分别位于基因组hg19 chr16:219568-224747上下游；所述WT引物对分别位于基因组hg19chr16:222951-223597上下游；所述3.7引物对分别位于基因组hg19 chr16:222188-227321上下游；和所述HBB引物对分别位于基因组hg19 chr11:5246715-5248391上下游。

2.根据权利要求1所述的引物组，其中所述引物组的序列如SEQ ID NO.1-10所示。

3.根据权利要求1所述的引物组，其中所述引物组用于多重PCR扩增HBA1/2和HBB基因片段。

4.一种同时检测HBA1/2和HBB基因突变的试剂盒，包括以下试剂：

(1)用于多重PCR扩增HBA1/2和HBB基因片段的试剂；和

(2)用于构建PacBio文库的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述用于多重PCR扩增的试剂包括DNA聚合酶、反应缓冲液和引物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述引物包括用于扩增HBA1/2和HBB基因的引物组，所述引物组包括如下引物对：

(1)SEA引物对；

(2)4.2引物对；

(3)WT引物对；

(4)3.7引物对；和

(5)HBB引物对其中所述SEA引物对分别位于基因组hg19 chr16:215396-234699上下游；所述4.2引物对分别位于基因组hg19 chr16:219568-224747上下游；所述WT引物对分别位于基因组hg19 chr16:222951-223597上下游；所述3.7引物对分别位于基因组hg19chr16:222188-227321上下游；和所述HBB引物对分别位于基因组hg19 chr11:5246715-5248391上下游。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中所述引物序列如SEQ ID NO.1-10所示。

8.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于同时检测HBA1/2和HBB基因的缺失型和非缺失型突变。

9.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于检测常见HBA1/2和HBB基因的不同突变是否连锁。

10.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述HBA1/2和HBB基因突变为常见HBA1/2和HBB基因突变，包括由HBA1/2基因缺失引起的--^SEA、-α^3.7与-α^4.2三种缺失型突变；位于HBA2基因的QS、CS、WS三种点突变；以及位于HBB基因的突变，包括以下17种常见的突变型：-32(C-A)、-30(T-C)、-29(A-G)、-28(A-G)、Cap+40-43(-AAAC)、Int(T-G)、CD14/15(+G)、CD17(A-T)、CD26(G-A)、CD27/28(+C)、CD31(-C)、CD41/42(-TCTT)、CD43(G-T)、CD71/72(+A)、IVS-I-1(G-T,G-A)、IVS-I-5(G-C)和IVS-II-654(C-T)。

11.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述多重PCR扩增在单反应管中完成。