[发明专利]一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法

权利要求书

1.一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：

步骤一：纳米四氧化三铁颗粒制备

分别配制浓度均为0.05～5mol/L的Fe³⁺盐溶液和Fe²⁺盐溶液，按照Fe3+与Fe2+物质的量的比为1.3～2.2混合，通入惰性气体除氧30min；加入表面活性剂，调整反应体系温度至60～70℃，得混合液；向混合液中滴加质量浓度为25％氨水至PH值为10～11，保持70～80℃反应3～6h，冷却至室温后，磁分离出黑色沉淀，依次用质量浓度为1％氨水、体积百分比浓度为50%乙醇及去离子水洗涤沉淀物数次至中性；-10～-20℃冷冻干燥24～48h，得到超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒；

步骤二：将超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒沉积在聚苯乙烯微球上

取10～200g聚苯乙烯微球，分散在5L乙醇水溶液中，超声搅拌3～15h，保持温度不低于50℃；加入表面活性剂100～300ml，加入步骤一所得到的超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒10～200g，降低温度至20℃以下并保持1～3h；磁分离出沉淀，向沉淀中加入稀盐酸，搅拌2～5h，然后用超纯水洗涤至溶液呈中性，-10～-20℃冷冻干燥24～48h，得到Fe₃O₄@苯乙烯磁性纳米颗粒；

步骤三：表面包被聚乙烯醇，并用戊二醛进行封闭

将100-1000ml纯水加热到50-80℃，超声搅拌状态下加入10-50g聚乙烯醇和100-500ul表面活性剂，升温到85℃，直至溶解，调节PH到3-5；添加步骤二所得到的Fe₃O₄@苯乙烯磁性纳米颗粒100～1000g，添加分散剂，超声搅拌，并逐渐降低温度至50℃，加入戊二醛，保持温度继续搅拌3h，得到纳米生物磁珠；将所得纳米生物磁珠用体积百分比浓度为40%～80%的乙醇洗涤，然后用超纯水洗涤至溶液呈中性，最后用超纯水分散保存；

步骤三中，所述聚乙烯醇分子量大小为1600-3500、聚合度为80-99；

步骤二和步骤三中，所述超声功率不低于1200W；

步骤一、步骤二和步骤三中，所述表面活性剂为曲拉通、壬基酚聚氧乙烯醚、植物油、月桂醇硫酸钠、AEO-3中的一种或几种的混合物。

2.如权利要求1所述的一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法，其特征在于：步骤一所述惰性气体为氩气。

3.如权利要求1所述的一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法，其特征在于：所述分散剂为乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸三钠、十六烷基溴化铵、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种混合。

4.如权利要求1所述的一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法，其特征在于：所述聚苯乙烯微球的粒径为500nm-10um。