[发明专利]一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法

说明书

本发明涉及一种用于全血DNA提取的纳米生物磁珠的制备方法，属于生物工程领域；其制备过程包含以下步骤：步骤1：纳米四氧化三铁颗粒制备；步骤2：将磁性纳米Fe3O4颗粒沉积在聚苯乙烯微球上；步骤3：表面包被聚乙烯醇，并用戊二醛进行封闭。所制备出的磁珠，其粒径均一，磁响应性能强，用于全血DNA提取可以得到高质量的DNA样本，尤其在去除样本中的无机盐杂质方面表现优异。

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及纳米生物磁珠，具体地，涉及一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法。

背景技术

随着DNA提取技术的不断完善和发展，磁珠法提取技术慢慢兴起，作为提取的核心材料生物纳米磁珠逐渐被人们所熟知。因为DNA提取是所有后续研究的第一步，所以DNA提取的效率和效果直接影响后续的研究。生物纳米磁珠是由磁性材料与高分子材料通过化学或物理方法复合 而成的一种具有众多优异性能的功能材料。

生物纳米磁珠作为近年发展起来的一种新型磁性材料，不但具有纳米效应，即表面 效应、小尺寸效应、宏观量子隧道效应和体积效应，还具有磁学性质，如超顺磁性与高磁化率等特性。其应用已经从传统的技术领域发展到高新技术领域，从单纯的磁学范围扩展到与磁学相关的交叉学科领域。以核酸分离领域应用最为广泛。

生物纳米磁珠虽然在生物医药领域应用日益广泛，但仍然存在一定的问题：国外品牌的生物纳米磁珠在生物领域使用较为成熟，但其价格较高，以毫升计价，通常是国产的5~6倍，国产磁珠由于不能掌握制作磁珠的核心制备技术，制备的纳米磁珠颗粒尺寸有一定尺寸分布 ，并且生物相容性差，而且，还存在分散性差、改性过程中强磁性难以保持和功能化程度偏低等缺点。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：

一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：

步骤一：纳米四氧化三铁颗粒制备

分别配制浓度均为0.05～5mol/L的Fe³⁺盐溶液和Fe²⁺盐溶液，按照Fe³⁺与Fe²⁺物质的量的比为1.3～2.2混合，通入惰性气体除氧30min；加入表面活性剂，调整反应体系温度至60～70℃，得混合液；向混合液中滴加质量浓度为25％氨水至PH值为10～11，保持70～80℃反应3～6h，冷却至室温后，磁分离出黑色沉淀，依次用质量浓度为1％氨水、体积百分比浓度为50%乙醇及去离子水洗涤沉淀物数次至中性；-10～-20℃冷冻干燥24～48h，得到超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒；

步骤二：将超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒沉积在聚苯乙烯微球上

取10～200g聚苯乙烯微球，分散在5L乙醇水溶液中，超声搅拌3～15h，保持温度不低于50℃；加入表面活性剂100～300ml，加入步骤一所得到的超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒10～200g，降低温度至20℃以下并保持1～3h；磁分离出沉淀，向沉淀中加入稀盐酸，搅拌2～5h，然后用超纯水洗涤至溶液呈中性，-10～-20℃冷冻干燥24～48h，得到Fe₃O₄@苯乙烯磁性纳米颗粒；

步骤三：表面包被聚乙烯醇，并用戊二醛进行封闭