[发明专利]一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒在审
申请号: | 201910515904.0 | 申请日: | 2019-06-14 |
公开(公告)号: | CN110172457A | 公开(公告)日: | 2019-08-27 |
发明(设计)人: | 齐存森;姜夏 | 申请(专利权)人: | 洛阳爱森生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/6806 |
代理公司: | 洛阳公信知识产权事务所(普通合伙) 41120 | 代理人: | 时亚娟 |
地址: | 471000 河南省洛阳市中国(河南)自由贸易试验*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 洗涤液 全血 发明试剂 建库 可用 生物工程领域 无机盐 纳米生物 标本库 裂解液 试剂盒 完整度 洗脱液 测序 磁珠 得率 去除 建设 | ||
1.一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:包含裂解液、纳米生物磁珠、洗涤液A、洗涤液S和洗脱液;所述裂解液中包含异硫氰酸胍、盐酸胍、柠檬酸三钠和Tween20;所述纳米生物磁珠为包裹有二氧化硅、聚乙烯醇、聚乙二醇或纤维素的氧化铁;所述洗涤液A中包含十六烷基三甲基溴化铵、Tris-Hcl、无水乙醇和FMES;所述洗涤液S中包含Tris-Hcl和无水乙醇;所述洗脱液中包含Tris-Hcl和EDTA二钠。
2.根据权利要求1所述的一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:所述裂解液的PH值为5.0~7.5;所述裂解液中异硫氰酸胍的浓度为1~3mM、盐酸胍的浓度为2~4M、柠檬酸三钠的浓度为100~200mM、Tween20的浓度为2%~4%。
3.根据权利要求1所述的一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:所述纳米生物磁珠的直径为200~3000nm,浓度为50~100mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:所述洗涤液A中十六烷基三甲基溴化铵的浓度为50~100mM、PH值为7.0~8.5的 Tris-Hcl的浓度为10~30mM、无水乙醇的体积百分数为30%~70%、FMES 的浓度为10~50mM。
5.根据权利要求1所述的一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:所述洗涤液S中PH值为7.0~8.5的Tris-Hcl的浓度为 10~30mM、无水乙醇的体积百分数为30%~70%。
6.根据权利要求1所述的一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:所述洗脱液的PH值为7.0~8.5;所述洗脱液中Tris-Hcl 的浓度为10~30mM、EDTA二钠的浓度为0.2-0.4mM的。
7.根据权利要求1所述的一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒,其特征在于:所述试剂盒的使用方法包括以下步骤:
步骤S1:取50-200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中,使用无菌移液器加入200-400ul裂解液,20~70℃水浴10~30min;
步骤S2:使用无菌移液器向离心管中加入300~500ul异丙醇和5~30ul纳米生物磁珠,震荡混匀5~10min;
步骤S3:将经步骤S2处理的离心管置于磁力架上45S,待纳米生物磁珠完全吸附至管壁之后,使用无菌移液器吸弃上清溶液;
步骤S4:使用无菌移液器向步骤S3离心管中加入500~800ul洗涤液A,将该离心管震荡混匀2min,置于磁力架上30s,待纳米生物磁珠完全吸附至管壁之后,使用无菌移液器吸弃上清溶液;
步骤S5:使用无菌移液器向步骤S4离心管中加入500~800ul洗涤液S,将该离心管震荡混匀2min,置于磁力架上30s,待纳米生物磁珠完全吸附至管壁之后,使用无菌移液器吸弃上清溶液;
步骤S6:使用无菌移液器向步骤S5离心管中加入70~200ul洗脱液,65℃水浴5~10min,然后将离心管置于磁力架上30s,待纳米生物磁珠完全吸附至管壁之后,使用无菌移液器吸取上清至新的离心管中,即获得所需DNA。
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