[发明专利]一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒

说明书

本发明涉及一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒，属于生物工程领域，其中全血DNA提取试剂盒主要包括裂解液、纳米生物磁珠、洗涤液A、洗涤液S和洗脱液；本发明试剂盒在洗涤液A中针对性添加了去除无机盐的成分，具有操作步骤简单、DNA得率高、完整度好、纯度高的特点。尤其是利用本发明试剂盒及试剂盒提供的操作方法，可简单快速得到能够直接用于二代测序的DNA样本，尤其适用于DNA标本库建设。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地，涉及一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒。

背景技术

随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点。在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析(GWAS)、候选SNP位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从各类样本中提取基因组DNA。由于血液样本取材方便，所含基因组DNA丰富可靠，因此上述许多研究均以血液作为样本提取完整的基因组DNA。提取纯化得到的基因组DNA浓度、纯度和一级结构的完整性都会影响到后续的研究，因此高效、可靠的基因组DNA提取方法是分子遗传学基础研究迫切需要的。

目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法和磁珠法。市场上也存在多种全血DNA提取试剂盒，但是都存在以下缺点：不能最大限度地去除蛋白、色素、脂类及其他抑制物；提取过程中使用苯酚、氯仿等有机溶剂；对血液样品的起始体积有限制，影响适应性；提取的DNA质量不好，不适于建库。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒，利用所述试剂盒，操作步骤简单，可简单快速得到能够直接用于二代测序的DNA样本，且DNA得率高、完整度好、纯度高，尤其适用于DNA标本库建设。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：

一种可用于建库的全血DNA提取试剂盒，其特征在于包含裂解液、纳米生物磁珠、洗涤液A、洗涤液S和洗脱液；所述裂解液中包含异硫氰酸胍、盐酸胍、柠檬酸三钠和Tween20；所述纳米生物磁珠为包裹有二氧化硅、聚乙烯醇、聚乙二醇或纤维素的氧化铁；所述洗涤液A中包含十六烷基三甲基溴化铵、Tris-Hcl、无水乙醇和FMES；所述洗涤液S中包含Tris-Hcl和无水乙醇；所述洗脱液中包含Tris-Hcl和EDTA二钠。

作为对上述方案的进一步优化，所述裂解液的PH值为5.0～7.5；所述裂解液中异硫氰酸胍的浓度为1～3mM、盐酸胍的浓度为2～4M、柠檬酸三钠的浓度为100～200mM、Tween20的浓度为2%～4%。

作为对上述方案的进一步优化，所述纳米生物磁珠的直径为200～3000nm，浓度为50～100mg/ml。

作为对上述方案的进一步优化，所述洗涤液A中十六烷基三甲基溴化铵的浓度为50～100mM、PH值为7.0～8.5的 Tris-Hcl的浓度为10～30mM、无水乙醇的体积百分数为30%～70%、FMES 的浓度为10～50mM。

作为对上述方案的进一步优化，所述洗涤液S中PH值为7.0～8.5的Tris-Hcl的浓度为 10～30mM、无水乙醇的体积百分数为30%～70%。

作为对上述方案的进一步优化，所述洗脱液的PH值为7.0～8.5；所述洗脱液中Tris-Hcl 的浓度为10～30mM、EDTA二钠的浓度为0.2-0.4mM的。

作为对上述方案的进一步优化，所述试剂盒的使用方法包括以下步骤：

步骤S1：取50-200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，使用无菌移液器加入200-400ul裂解液，20～70℃水浴10～30min；

步骤S2：使用无菌移液器向离心管中加入300～500ul异丙醇和5～30ul纳米生物磁珠，震荡混匀5～10min；