[发明专利]来源于蛴螬酶解三级分离物的多肽及其制备方法

权利要求书

1.来源于蛴螬酶解三级分离物的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。

2.根据权利要求1所述的来源于蛴螬酶解三级分离物的多肽，其特征在于，所述多肽由包括以下步骤的方法制备：

（1）采用葡聚糖凝胶柱G-15，以超纯水为流动相，在流速为14 -16 mL/min、柱温27 -33 ℃、波长为215- 225 nm的条件下对蛴螬酶解液进行分离，梯度洗脱程序为16 min，用超纯水配制浓度为10 mg/mL的蛴螬酶解液溶液，上样量为2 mL，根据蛴螬提取物在制备色谱中的分离时间，每2 min收集一管，收集2 – 4min的馏分，得到初级分离物，

所述蛴螬酶解液由包括以下步骤的方法制备得到：

（a）将蛴螬加入pH 6.8～7.2的缓冲体系中，高速匀浆，得到虫浆液，使蛴螬的浓度为5%；

（b）向虫浆液中加入脂肪酶，脂肪酶与蛴螬的比例为0.6%，在38～42℃条件下酶解3小时；

（c） 将步骤（b）得到的液体灭活，静止分层后，离心，取上清液，得到蛴螬酶解液；

（2）以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，流动相为0.1%三氟乙酸-水-乙腈系统，三氟乙酸-水与乙腈的体积比为95:5，在流速1 mL/min、柱温27 - 33 ℃、波长为215- 225 nm的条件下对初级分离物进行分离，收集15 – 16 min的馏分，得到次级分离物；

（3）以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，流动相为0.1%三氟乙酸-水-乙腈系统，三氟乙酸-水与乙腈的体积比为95:5，在流速1 mL/min、柱温27 - 33 ℃、波长为215- 225 nm的条件下对次级分离物进行分离，收集2 – 3 min的馏分，即得。

3.根据权利要求2所述的来源于蛴螬酶解三级分离物的多肽，其特征在于，步骤（c）中，将液体在70 ℃条件下灭活 30 min，4 ℃ 静置过夜后，于4 000 r/min，4 ℃ 离心15 min，取上清液。

4.来源于蛴螬酶解三级分离物的多肽的制备方法，其特征在于，所述来源于蛴螬酶解三级分离物的多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述方法包括以下步骤：

（1）采用葡聚糖凝胶柱G-15，以超纯水为流动相，在流速为14 -16 mL/min、柱温27 -33 ℃、波长为215- 225 nm的条件下对蛴螬酶解液进行分离，梯度洗脱程序为16 min，用超纯水配制浓度为10 mg/mL的蛴螬酶解液溶液，上样量为2 mL，根据蛴螬提取物在制备色谱中的分离时间，每2 min收集一管，收集2 – 4min的馏分，得到初级分离物，

所述蛴螬酶解液由包括以下步骤的方法制备得到：

（a）将蛴螬加入pH 6.8～7.2的缓冲体系中，高速匀浆，得到虫浆液，使蛴螬的浓度为5%；

（b）向虫浆液中加入脂肪酶，脂肪酶与蛴螬的比例为0.6%，在38～42℃条件下酶解3小时；

（c） 将步骤（b）得到的液体灭活，静止分层后，离心，取上清液，得到蛴螬酶解液；

（2）以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，流动相为0.1%三氟乙酸-水-乙腈系统，三氟乙酸-水与乙腈的体积比为95:5，在流速1 mL/min、柱温27 - 33 ℃、波长为215- 225 nm的条件下对初级分离物进行分离，收集15 – 16 min的馏分，得到次级分离物；

（3）以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，流动相为0.1%三氟乙酸-水-乙腈系统，三氟乙酸-水与乙腈的体积比为95:5，在流速1 mL/min、柱温27 - 33 ℃、波长为215- 225 nm的条件下对次级分离物进行分离，收集2 – 3 min的馏分，即得。