[发明专利]一种快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的试剂盒及其应用

权利要求书

1.试剂盒在快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型中的应用，所述试剂盒包含由引物ComF、引物3A-R、引物15A-R、引物NIV-R组成的引物组合，其中，引物ComF、引物3A-R、引物15A-R、引物NIV-R分别具有SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，所述应用包括以下步骤：

获取待鉴定禾谷镰刀菌的基因组DNA；

以所述DNA为模板，利用所述的试剂盒进行PCR扩增；

检测PCR扩增产物，以确定禾谷镰刀菌产毒基因型，

如果PCR扩增产物为836bp，则待鉴定禾谷镰刀菌能够产生3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇；如果PCR扩增产物为1116bp，则待鉴定禾谷镰刀菌能够产生15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇；如果PCR扩增产物为1404bp，则待鉴定禾谷镰刀菌能够产生雪腐镰刀菌烯醇。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包含DNA聚合酶、dNTPs和PCR缓冲液。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，利用测序法检测PCR扩增产物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，利用琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物。

5.根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于，其中PCR扩增的体系为：总体积20μL：2×EasyTaq PCR SuperMix 10μL，10μmol/L上游引物1μL，10μmol/L下游引物1μL，DNA模板50ng，ddH₂O补至20μL。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，其中PCR扩增的程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，62℃复性40s，72℃延伸90s，25个循环；72℃延伸5min。