[发明专利]一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选方法在审
| 申请号： | 201910521135.5 | 申请日： | 2019-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN110229930A | 公开（公告）日： | 2019-09-13 |
| 发明（设计）人： | 许奕;宋顺;李敬阳;金志强;徐碧玉;王安邦;李羽佳;黄东梅;魏卿 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院海口实验站;中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6897 | 分类号： | C12Q1/6897;C40B30/04 |
| 代理公司： | 重庆百润洪知识产权代理有限公司 50219 | 代理人： | 刘立春 |
| 地址： | 570100 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 启动子 转录因子 核心区域 通道蛋白 香蕉水 筛选 基因启动子 酵母单杂交 香蕉 干旱胁迫条件 顺式作用元件 转基因香蕉 干旱处理 抗旱能力 区段构建 诱饵载体 直接结合 单杂交 染色 酵母 扩增 文库 引物 诱饵 抗旱 验证 基因 检测 分析 研究 | ||
1.一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：判断启动子的核心区域，根据香蕉A基因组设计启动子的引物进行扩增，扩增长度为1362bp，通过plantcare和PLACE分析其顺式作用元件，进行启动子GUS活性的检测，通过染色情况来判断启动子的核心区域B；
S2：酵母单杂交筛选与启动子互作的转录因子，用酵母单杂交的方法进行验证，将启动子核心区域B作为诱饵区段构建诱饵载体，筛选酵母干旱处理的香蕉单杂交文库，确定与核心区域B序列相互作用的结合蛋白，获取转率因子C信息；
S3：进一步验证转率因子C与核心区域B的相互作用，qRT-PCR检测干旱胁迫处理下的结合蛋白，获取能够能够协同核心区域B基因响应干旱胁迫的结合蛋白D；
S4：进一步证明转率因子C与核心区域B的启动子区域结合，进行体外互作验证，进行了双荧光素酶的测定。
2.根据权利要求1所述的一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选方法，其特征在于，所述S1中以转化CaMV35S启动子的转基因拟南芥作为对照，对100㎜，200㎜，300㎜18％PEG 6000处理的15天转基因拟南芥小苗的叶片和根系分别进行启动子GUS活性的检测。
3.根据权利要求1所述的一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选方法，其特征在于，所述S3中，将五叶一心的香蕉苗进行干旱处理，以其为模版，对筛选出来的结合蛋白在干旱胁迫条件下进行qRT-PCR检测。
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