[发明专利]一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选方法

说明书

本发明公开了一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选方法，包括以下步骤，判断启动子的核心区域，根据香蕉A基因组设计启动子的引物进行扩增，扩增长度为1362bp，通过plantcare和PLACE分析其顺式作用元件，进行启动子GUS活性的检测，通过染色情况来判断启动子的核心区域B，酵母单杂交筛选与启动子互作的转录因子，用酵母单杂交的方法进行验证，将启动子核心区域B作为诱饵区段构建诱饵载体，筛选酵母干旱处理的香蕉单杂交文库。本发明鉴定出在干旱胁迫条件下，与MaPIP1；1启动子直接结合的转录因子，更加方便对香蕉水通道蛋白基因的研究,有助于提升转基因香蕉的抗旱能力，有助于进一步理解MaPIP1；1的抗旱机制。

技术领域

本发明涉及启动子转录因子技术领域，尤其涉及一种香蕉水通道 蛋白基因启动子转录因子的筛选方法。

背景技术

香蕉前期植株较小，根系浅生，易受旱，其叶面积大，蒸腾量大， 尤其是在高温季节，香蕉受到干旱后，叶片严重失水，导致香蕉叶片 的细胞质膜透性增大，极大地伤害香蕉正常的生理代谢活动，造成香 蕉减产和品质下降。香蕉栽培生产中，耗水量大，每生产500克干物 质，需要吸收300千克水分。香蕉在营养生长阶段遇上干旱，会使香 蕉营养器官生长发育不良，生长速度和生长量显著下降，受旱严重时， 叶片下垂，枯黄凋萎，气孔关闭，光合效能降低；在花芽分化前遇旱， 会使营养器官出现早衰，营养积累少，花芽分化受到影响，果实的梳 数和单果数明显减少，从而造成减产。水通道蛋白是一类位于各种细 胞膜上的小分子跨膜蛋白，能够调节水分以及其他小分子物质的运 输，在植物生长发育和适应逆境胁迫过程中起着重要的作用。对于 香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选，关系到能否成功制备抗 旱性能好的转基因香蕉，所以现提出了一种香蕉水通道蛋白基因启动 子转录因子的筛选方法。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种香蕉水通道蛋 白基因启动子转录因子的筛选方法。

本发明提出的一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子的筛选 方法，包括以下步骤：

S1：判断启动子的核心区域，根据香蕉A基因组设计启动子的引 物进行扩增，扩增长度为1362bp，通过plantcare和PLACE分析其 顺式作用元件，进行启动子GUS活性的检测，通过染色情况来判断启 动子的核心区域B；

S2：酵母单杂交筛选与启动子互作的转录因子，用酵母单杂交的 方法进行验证，将启动子核心区域B作为诱饵区段构建诱饵载体，筛 选酵母干旱处理的香蕉单杂交文库，确定与核心区域B序列相互作用 的结合蛋白，获取转率因子C信息；

S3：进一步验证转率因子C与核心区域B的相互作用，qRT-PCR 检测干旱胁迫处理下的结合蛋白，获取能够能够协同核心区域B基因 响应干旱胁迫的结合蛋白D；

S4：进一步证明转率因子C与核心区域B的启动子区域结合，进 行体外互作验证，进行了双荧光素酶的测定。

优选地，所述S1中以转化CaMV35S启动子的转基因拟南芥作为 对照，对100㎜，200㎜，300㎜18％PEG 6000处理的15天转基 因拟南芥小苗的叶片和根系分别进行启动子GUS活性的检测。

优选地，所述S3中，将五叶一心的香蕉苗进行干旱处理，以其 为模版，对筛选出来的结合蛋白在干旱胁迫条件下进行qRT-PCR检测。

本发明中的有益效果为：

该方法通过酵母单杂交的方法，首次在植物中直接鉴定出在干旱 胁迫条件下，与MaPIP1；1启动子直接结合的转录因子，更加方便对 香蕉水通道蛋白基因的研究,有助于提升转基因香蕉的抗旱能力，有 助于进一步理解MaPIP1；1的抗旱机制。

附图说明

图1为本发明提出的一种香蕉水通道蛋白基因启动子转录因子 的筛选方法的流程示意图。