[发明专利]草鱼adiponectin A基因、编码蛋白及其应用

权利要求书

1.草鱼adiponectin A基因，其特征在于：该草鱼adiponectin A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.权利要求1所述的草鱼adiponectin A基因编码的草鱼adiponectin A蛋白，其特征在于：该草鱼adiponectin A蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3. 一种含有权利要求1所述的草鱼adiponectin A基因的重组表达载体。

4. 根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体利用原核表达质粒pET22b为模板，通过PCR方法进行线性化；再利用自己构建的pMD19-T-adiponectin A载体为模板，通过PCR方法在编码草鱼adiponectin A蛋白基因的两侧引入与pMD19-T-adiponectin A载体克隆位点两端完全一致的15 bp同源序列，得到带有酶切接头的编码草鱼adiponectin A蛋白的基因，分别经分离纯化后，将pET22b线性化载体和带有酶切接头的编码草鱼adiponectin A蛋白的基因混合后用T4连接酶16℃连接过夜后用标准氯化钙转化法转入大肠杆菌DH5α中，用LB平板筛选具Ampicillin抗性的转化子，即构建成含有编码草鱼adiponectin A蛋白基因的表达载体pET22b-adiponectin A。

5. 权利要求3或4所述的重组表达载体转化的大肠杆菌重组菌株，其特征在于：该重组菌株是由含有编码草鱼adiponectin A蛋白基因的表达载体pET22b-adiponectin A转化大肠杆菌BL21而得到的重组菌株pET22b-adiponectin A-BL21。

6. 权利要求5所述的大肠杆菌重组菌株在制备重组草鱼adiponectin A蛋白中的应用。

7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于重组草鱼adiponectin A蛋白的具体制备过程为：将重组菌株接种在LB液体培养基中，37℃，20 rpm培养14-16 h，按照体积比1:100接种在500 mL LB液体培养基中，37℃，200 rpm培养至OD600达到0.5-0.8，然后加入IPTG至终浓度为1 mM，37℃，200 rpm培养3 h后6000 g离心10 min收集菌体，超声破碎后6500 g离心15 min收集沉淀，沉淀用含有6 M尿素的Binding buffer溶解后，经分离纯化得到重组草鱼adiponectin A蛋白。