[发明专利]草鱼adiponectin A基因、编码蛋白及其应用

说明书

本发明公开了一种草鱼adiponectin A基因、编码蛋白及其应用，属于基因工程技术领域。本发明的技术方案要点为：草鱼adiponectin A基因，该草鱼adiponectin A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，还公开了含有上述草鱼adiponectin A基因的重组表达载体、重组菌株及其在制备草鱼促生长剂或添加剂中的应用。本发明首次扩增编码草鱼adiponectin A蛋白的基因，并将该基因构建表达载体和重组大肠杆菌菌株，利用重组大肠杆菌菌种在体外获得大量表达的草鱼adiponectin A蛋白，该蛋白可以用于制备适合草鱼使用的促生长剂或添加剂。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种草鱼adiponectin A基因、编码蛋白及其应用。

背景技术

脂肪组织不仅能够储存能量，还是一个功能活跃的内分泌器官。由脂肪细胞合成和分泌，并释放到循环系统中的内分泌因子，被统称为脂肪细胞因子，它们对糖类和脂质代谢的调控发挥着重要作用。脂联素(adiponectin)是哺乳类血液中蛋白水平最高的脂肪细胞因子，它与其受体(AdipoR1和AdipoR2)结合后，能够通过激活AMPK和PPARα等信号通路，改善胰岛素抵抗，提高葡萄糖的摄入量，促进脂肪酸的β氧化作用。因此，脂联素具有促进葡萄糖摄取、降血糖、抗脂肪肝病等生理功能。

草鱼属鲤形目，鲤科，雅罗鱼亚科，草鱼属。草鱼以其肉质细嫩、个体大、肌间刺少而备受消费者喜爱。在我国大宗淡水鱼中，草鱼养殖产量常年位居第一。目前草鱼饲料还需要添加大量的动植物蛋白，但蛋白质成本高昂，而糖类和脂肪则价格较为低廉。糖类和脂肪可以减少用于供能所消耗的蛋白质，具有节约蛋白质的作用。饲料中适当提高糖类和脂质的含量，可以替代部分作为能源消耗的蛋白质，从而提高蛋白质的利用率。饲料中糖的含量过高也会引起生长缓慢，鱼对糖的利用能力有限；脂类含量太高会导致脂肪肝，使肝功能减弱，解毒力下降。但目前在草鱼人工养殖中还没有一种能有效促进糖类和脂质利用的饲料添加剂。

发明内容

本发明的目的是提供了一种草鱼adiponectin A基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌株及其在制备草鱼促生长剂或添加剂中的应用。

本发明为实现上述目的采用如下技术方案，草鱼adiponectin A基因，该草鱼adiponectin A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明扩增了编码草鱼adiponectin A蛋白的基因，克隆的方法是常规的基因克隆方法，通过设计引物，利用草鱼肾脏cDNA为模板，经过PCR后得到目的基因片段，对PCR产物进行回收后，将得到的目的基因片段连接到pMD19-T载体为pMD19-T-adiponectin A。

本发明提供了上述草鱼adiponectin A基因编码的草鱼adiponectin A蛋白，该草鱼adiponectin A蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明构建了含有编码草鱼adiponectin A蛋白的大肠杆菌表达载体，该表达载体的构建方法是按常规同源重组的方法。利用原核表达质粒pET22b为模板，通过PCR方法进行线性化；利用自己构建的pMD19-T-adiponectin A载体为模板，通过PCR方法在编码草鱼adiponectin A蛋白基因的两侧引入与载体克隆位点两端完全一致的15bp同源序列，得到带有酶切接头的编码草鱼adiponectin A蛋白的基因。分别经分离纯化后，将两者进行同源重组连接，即构建成含有编码草鱼adiponectin A蛋白基因的表达载体pET22b-adiponectin A。

本发明还用上述含有编码草鱼adiponectin A蛋白的相应表达载体pET22b-adiponectin A构建了能够高效表达草鱼adiponectin A蛋白的大肠杆菌重组菌株。该重组菌株由含有编码草鱼adiponectin A蛋白基因的表达载体pET22b-adiponectin A转化大肠杆菌BL21而得到的菌株，命名为pET22b-adiponectin A-BL21。