[发明专利]一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体有效
| 申请号： | 201910523234.7 | 申请日： | 2019-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN110218737B | 公开（公告）日： | 2022-12-23 |
| 发明（设计）人： | 易犁;梅萌;李俊红;汪声晨;张桂敏 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/66;C12N15/62;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 强红刚 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 内质网 滞留 信号肽 提高 酵母 细胞 表面 展示 fab 片段 抗原 结合 能力 | ||
1.一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，该重组载体的结构为pESD-ERS-HA-CL-VL-
2.根据权利要求1所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述的内质网滞留信号肽选自如下的任一种或两种：FEHDEL、WEHDEL。
3.根据权利要求1所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述的内质网滞留信号肽融合到Fab轻链的羧基端。
4. 根据权利要求1所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述重组载体的序列为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQID NO：3或SEQ ID NO：4所示。
5.根据权利要求1-3任一项所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述的抗体为Adalimumab或Infliximab。
6.一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体的构建方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
1）采用PCR克隆方法分别得到Adalimumab和Infliximab的VH-CH1-FLAG-Aga2复合体的基因片段；
2）将步骤2）获得的PCR产物用限制性内切酶PstⅠ和EcoRⅠ双酶切和琼脂糖凝胶回收后，再与经过限制性核酸内切酶PstⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pESD载体酶连。酶连产物直接转化到大肠杆菌XL-GOLD感受态细胞中，经菌落PCR验证和测序确认后分别得到含Adalimumab和Infliximab VH-CH1基因的重组质粒pESD-
3）采用PCR克隆方法分别得到Adalimumab和Infliximab的VL-CL-HA-ERS复合体的基因片段，其中ERS包括：DEL、HDEL、KDEL、FEHDEL、WEHDEL；
4）将步骤3）获得的PCR产物回收后，用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和琼脂糖凝胶回收后，再与经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和琼脂糖凝胶回收的pESD-
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