[发明专利]一株花青素产生菌株CJ6及其应用

说明书

本发明涉及一株花青素产生菌株CJ6及其应用，属于微生物资源与技术领域。所述菌株CJ6经鉴定为层生镰刀菌(Fusarium proliferatum)，保藏号为CGMCC NO.14793。菌株CJ6适生范围宽，易培养，可利用农业固体废弃物、粮食原料以及多种碳源合成花青素，生产成本低，周期短，环境友好，可实现周年生产，为花青素生产带来了一种新资源，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及一株花青素产生菌株CJ6及其应用，属于微生物资源与微生物技术领域。

背景技术

花青素属于类黄酮化合物，具有清除自由基、抗癌、抗氧化、抗突变、抗辐射、预防心脑血管疾病，改善皮肤弹性、增进视力、改善睡眠、保护肝脏等生理作用，被广泛应用于医药、化妆品、保健品、食品等领域。

植物花青素在蓝莓，桑葚，葡萄等植物中含量较高，是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。其颜色随着pH值变化而呈现出红、蓝、紫不同颜色，在500-550nm可见光区域有吸收峰。

植物生长受土壤、温度、地域等环境因素影响较大，且收获具有季节性。用植物生产花青素，因受资源影响，较难做到周年生产。

利用微生物生产花青素，不受季节影响，成本低，可以实现周年生产。本发明公开一株花青素产生菌，为花青素生产提供一种新资源和新途径。

发明内容

本发明的目的是提供了一株花青素产生菌株CJ6及其应用。

本发明所述的花青素产生菌株CJ6，通过对其形态特征观察，基因组DNA提取，PCR扩增和18S rDNA-ITS序列分析，在NCBI数据库进行Blast比对，进化树构建，发现菌株CJ6与Fusarium proliferatum菌的同源性最高，结合菌体的形态特征，确定该菌株为层生镰刀菌(Fusarium proliferatum),命名为层生镰刀菌CJ6(Fusarium proliferatum CJ6)。该菌株已于2017年11月10日保藏于中国微中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.14793，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本发明所述的花青素产生菌CJ6，采用下述技术方案获得：

1、菌株筛选

采集植物根际土样多份，用生理盐水稀释成10^-1-10^-8的溶液，分别在牛肉膏蛋白胨固体培养基、马丁氏固体培养基、马铃薯葡萄糖(PDA)固体培养基上涂布，分离菌株。每天观察，并挑取平板中呈现红色、蓝色、紫色的菌落，转接到新的同种固体培养基上进行多次划线纯化，直至得到纯菌落，并对菌落形态进行观察。

取上述纯化的菌株，分别接入马丁氏和PDA液体培养基中进行摇瓶培养，得到不同菌株的培养液。取培养液开展酸碱变色反应、类黄酮定性颜色反应、紫外可见吸收峰测定以及液相/质谱(LC/MS)测定。

由测定结果得知，分离纯化得到的菌株CJ6，其培养液具有花青素相关的颜色反应与吸收峰，且利用液相/质谱方法，检测到培养液中含有花青素，从而筛选得到一株能够产生花青素的菌株CJ6。

2、菌株鉴定

CJ6菌株形态特征观察：该菌株接种到PDA固体平板上，7-8天可长满直径为9cm平板。菌落外观为棉絮状，呈粉白色到紫色，紫色代谢产物可转移到培养基中，平板背面呈现白紫相间或紫色，培养时间延长，菌落和培养基均会变成紫黑色。菌落表面有时会产生紫黑色液滴分泌物。产孢，分生孢子卵圆形。