[发明专利]一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的方法及其试剂盒

说明书

一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的方法及其试剂盒。该方法包括利用免疫磁珠富集金黄色葡萄球菌，对富集的金黄色葡萄球菌进行DNA提取，对提取的金黄色葡萄球菌的DNA进行LAMP检测等步骤。本发明的方案，使用链霉亲和素‑生物素介导偶联的免疫磁珠，制备时间为1h，大大降低了制备免疫磁珠的时间。同时链霉亲和素与生物素间有极高的亲和力，故本发明的免疫磁珠能够与抗体和磁珠直接偶联制备的免疫磁珠相比，本发明的磁珠表面能够结合更多抗体，从而大大提高了捕获率。

技术领域

本发明属于食品微生物检测技术领域，涉及一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的方法及其试剂盒。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌，常存在于奶、肉、蛋、鱼、虾等食品中，其产生的肠毒素可引起食物中毒，导致皮肤和软组织感染、败血症、骨髓炎和肺炎等疾病。目前我国用于检测食品中食源性致病菌的传统方法多为选择性培养基、显微镜镜检和生化培养鉴定等，其优点是操作简便，所需设备简单，但耗时长、灵敏性差，无法快速检测，会对经济生产活动产生一定的影响。

随着免疫学和分子生物学在食品安全方面的应用，致病菌的检测效率正在逐步提升，目前常采用的方法有聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、基因芯片法、酶联免疫吸附测定技术(enzymelinkedimmunosorbent assay,ELASA)、生物传感器等，但这些方法仍需要昂贵的试剂与实验设备，无法满足突发公共卫生事件时对食源性致病菌快速、准确、便携的现场检测需求。

免疫磁珠分离技术(immunomagnetic separation，IMS)就是目前运用广泛的一种快速有效的前处理方法,能够缩短微生物检测的增菌时间,实现微生物致病菌的快速检测。1979年,Ugelstad等人首次制成了分离细胞效果极佳的免疫磁珠，因其操作简便、特异性强、可有效保持目标物原有的特性,被广泛应用于分子生物学领域。该技术利用具有磁性的微颗粒结合特定抗体，在液相中能特异性地与相应的抗原结合，依靠磁场的作用力快速地与样品稀释液分离，从而达到富集、纯化样品的目的。

2000年，Notomi等人提出了一种新型核酸扩增技术，环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，该技术利用4～6条的特异性引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶(Bst DNA聚合酶)，在等温条件(60～65℃)下可高效、快速、特异性地扩增靶序列。该技术避免了核酸扩增对温度和昂贵仪器的要求，并且该技术特异性强、灵敏度高、实验步骤简单、不需要专业的技术人员，适合现场快速检测食源性致病菌。本发明建立了一种免疫磁珠-环介导等温扩增法(IMS-LAMP)对金黄色葡萄球菌进行快速、准确的检测，该方法避免使用价格高昂的仪器，降低了实验成本。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的方法及。

本发明所解决的技术问题还在于提供一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一方面，本发明公开了一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：

1)利用免疫磁珠富集金黄色葡萄球菌:取1mL待测样品于1.5mL离心管中,投入免疫磁珠300μL混匀；垂直混匀仪上室温孵育30min后，将其置于磁力架上3min使磁珠充分吸附后，将上清液弃去，取下磁力架上的离心管，加入1mL的0.01mol/LPBS洗涤悬浮，充分混匀，然后置于磁力架上3min，使磁珠充分吸附后，弃去悬浮液，重复洗涤3次，加入1mL0.01mol/LPBS震荡重悬磁珠，将富集得到的磁珠-菌体复合物用于后续的DNA提取及环介导等温扩增法(LAMP)的检测；